For å begynne, injiser eksperimentmusene intraperitonealt med 0,1 ml fortynnet blodoppløsning infisert med Trypanosomao evansi, eller PBS for kontrollgruppen. Før du utfører en grimasevurdering, sørg for at hver mus er godt synlig inne i kammeret. Undersøk hver mus for fravær av lesjoner på lemmer, mage og ansikt, samt eventuelle endringer i pelsen.
Observer musens orbitalområde. Musens åpne øyne indikerer fravær av smerte, mens lukkede øyne indikerer merkbar smerte. Undersøk deretter musens neseområde.
Kategoriser en normal nese som fravær av smerte, mens en bule på neseryggen betyr merkbar smerte. Undersøk musens kinn og klassifiser uendrede kinn som smertefrie. Tilstedeværelsen av buler på begge kinnene indikerer merkbar smerte.
Deretter observerer du plasseringen av musens ører. Runde ører indikerer ingen smerte, mens ører som roterer utover eller bakover og danner en spiss form bort fra ansiktet indikerer åpenbar smerte. Undersøk musens værhår.
Klassifiser værhår med den naturlige nedadgående kurven som fravær av smerte, mens værhår enten trukket tilbake mot kinnet eller trukket fremover betyr merkbar smerte. Infiserte mus viste bemerkelsesverdige reduksjoner i mekanisk terskel på høyre bakpote på dag 3 etter infeksjon, og vedvarte lavere enn kontrollene de påfølgende to dagene. Tilsvarende viste abdominal taktil følsomhet visceral allodyni hos infiserte mus på dag 3 etter infeksjon, som vedvarte i de påfølgende to dagene sammenlignet med kontroller.