首先，根据制造商的说明在 O.5K 呼吸计中安装 2 毫升腔室。打开仪器并将其连接到提供的软件进行数据采集。用去离子水清洗腔室三次。
用 0.54 毫升 MiR05 代替水并完全关闭塞子。去除多余的缓冲液后，抬起塞子，使室内氧与室氧平衡。将色谱柱置于磁性细胞分离器的磁场中，并用三毫升RP5洗涤色谱柱。
将新鲜分离的外周血单核细胞或 PBMC 沉淀重新悬浮于 80 μL RP5 和 20 μL 抗 CD14 微珠中。将细胞在 4 摄氏度下孵育 15 分钟。在将悬浮液加载到色谱柱上之前，用一毫升 RP5 稀释细胞。
收集流入 15 毫升锥形管的未标记细胞，标记为流过一“用 3 毫升 RP5 洗涤柱三次，以收集流过液体。小心地将色谱柱从磁场中取出，并将其放在新的 15 毫升锥形管上。加入 5 毫升 RP5 后，将柱塞推入色谱柱，将内容物收集到管中。
将流经一个管离心后，使用抗CD3微珠与细胞重复分离步骤，以获得T淋巴细胞。离心含有 CD3 阳性 T 细胞和 CD14 阳性单核细胞的细胞。弃去上清液后，将沉淀重新悬浮于一毫升RP 5中。
使用血细胞计数器确定细胞浓度。将 250 万个单核细胞和 500 万个 T 细胞添加到新的离心管中。沉淀细胞并将它们重新悬浮在 20 微升的 MiR05 中。
安装荧光传感器并开始实验 file 在 O2K 呼吸计单元上。使用绿色LED荧光传感器，设置AMR滤光片，将荧光计的增益和强度调节到1000。将腔室容积设置为 0.5 毫升，并调整布局以查看氧通量和 TMRM 荧光。
一旦氧通量稳定，就根据制造商的协议执行空气氧校准。关闭塞子以密封腔室。使用 Hamilton 注射器，注射 2.5 微升 0.05 毫摩尔四甲基罗丹明甲酯或 TMRM 四次。
每次进样时用荧光信号校准流量传感器，代表 0、0.25、0.5、0.75 和 1.0 μmol 的 TMRM。注射 20 微升 MiR05 以运行空白实验。氧通量稳定后，选择氧通量和 TMRM 信号并将其标记为前单元。
注射 20 微升含有细胞的细胞悬液并测量约 10 分钟。然后选择氧通量和 TMRM 信号并将其标记为单元。然后按顺序重复每种处理的步骤，并适当标记氧通量和TMRM信号。
一旦氧通量稳定，注射 1 μL 1.25 毫摩尔抗霉素 A 以抑制线粒体呼吸。对于每个空白实验，将样品前 TMRM 浓度设置为 1 以计算背景比。计算TMRM的后续比例减少和所有空白实验的平均背景比。
然后将样品实验的样品前 TMRM 乘以每个样品实验每次进样的平均背景比。将实验的背景减去样品的测量 TMRM 值。接下来，从每次注射中减去 FCCP 背景校正的线粒体膜电位。
要对 ADP 驱动的下降进行归一化，请将最高和最低膜电位分别设置为 100% 和 0%，并将数据拟合到非线性拟合回归模型中。对健康志愿者 ADP 驱动的 T 细胞和单核细胞变化的比较研究表明，与 T 细胞相比，单核细胞表现出更大的线粒体膜电位损失。与 T 细胞相比，单核细胞 ADP 对线粒体膜电位的半数最大抑制浓度较低。
在两种细胞类型中均未检测到 ADP 耗氧率的典型剂量反应增加。
