للبدء ، املأ قارورة T75 ب 30 ملليلتر من وسط AC6. أضف بشكل معقم محتويات قارورة عينة تحتوي على الشوكميبا في القارورة. احتضان الثقافة لمدة ثلاثة إلى خمسة أيام عند 26 إلى 30 درجة مئوية حتى تصل القارورة إلى التقاء 50٪ إلى 80٪.
في اليوم السابق للخلايا المطلوبة ، هز القارورة المستنبتة الرئيسية واضربها بخفة مرتين لإزاحة التروفوزيت الملتصقة. املأ قارورة T75 جديدة ب 30 ملليلتر من وسط AC6. ثم نقل ملليلتر من الثقافة الرئيسية في القارورة.
احتضان الثقافة عند 26 إلى 30 درجة مئوية لمدة 18 إلى 24 ساعة. قبل الحصاد ، استخدم مجهرا مضبوطا على تكبير 4x لفحص مجموعة trophozoite بصريا للتأكد من الالتصاق والتوحيد. ضرب بسرعة القارورة مرتين لإزاحة trophozoites الملتصقة.
ثم صب المحتويات في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 500 جرام لمدة خمس دقائق لحبيبات الأميبا. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحنك في ملليلتر إلى 10 ملليلتر من ربع محلول رينغر.
دوامة العينة المعاد تعليقها لضمان الخلط المتساوي. ثم انقل 10 ميكرولتر من العينة إلى مقياس الدم القابل للتصرف. عد وحدات تشكيل المستعمرة لكل ملليلتر.
أضف محلول رينغر لتخفيف حبيبات الأميبا إلى التركيز المطلوب. بعد ذلك ، بذر الأميبا على طبق جيد. لزرع الأميبا في خلية تدفق معقمة من الألومنيوم ، أضف ببطء أربعة ملليلتر من التعليق عبر المنافذ المعقمة لخلية التدفق.
ثم قم بتثبيت المنافذ مغلقة.