För att utföra passage av neurosfärer erhållna från neurostamceller isolerade från neuronens subventrikulära zon, samla in mediet som innehåller neurosfärerna från multibrunnsplattorna och överför dem till ett 15 milliliters centrifugrör. Centrifugera neurosfärerna i fem minuter vid 300 G. Efter att ha avlägsnat supernatanten, tillsätt 200 mikroliter enzymatisk lösning till pelleten och knacka försiktigt på botten av röret för att få bort det. Inkubera i 10 minuter i rumstemperatur för att underlätta dissociationen av neurosfären.
Tillsätt sedan en milliliter kontrollmedium för att stoppa den enzymatiska reaktionen. Dissociera neurosfärer mekaniskt med en P 1000 mikropipett genom att pipettera upp och ner 10 till 20 gånger. Tillsätt ytterligare en volym på fyra milliliter kontrollmedium och blanda genom invertering för att tvätta cellerna.
Centrifugera cellerna i fem minuter vid 300 G innan supernatanten avlägsnas. Tillsätt en milliliter komplett medium och återsuspendera pelleten för att homogenisera den cellulära suspensionen genom att pipettera upp och ner 10 gånger. Efter spädning av en del av en alikvot av cellsuspensionen med en del trypanblått, räknas cellsuspensionen med hjälp av en Neubauer-kammare.
För att expandera kulturen, sås celler med en densitet av 10 000 celler per kvadratcentimeter med hjälp av ett komplett medium i en lämplig odlingsplatta eller kolv.
