Använd det rekommenderade kitet och fortsätt att förbereda 95 mikroliter av nukleofektionslösningen i ett 1.5 milliliters rör för varje önskat nukleofektionstillstånd. Förbered också en T25-kolv fylld med fyra milliliter förvärmt komplett medium per tillstånd och förvara den i inkubatorn tills den används. För att utföra nukleofekt, centrifugera önskat antal celler i fem minuter vid 300 G innan supernatanten avlägsnas.
Tillsätt en milliliter DPBS och återsuspendera pelleten homogent genom att pipettera upp och ner 10 gånger. Efter att ha upprepat centrifugeringen, suspendera pelleten igen i 95 mikroliter nukleofektionslösning. Kombinera de 95 mikroliter cellerna med en förblandad lösning som innehåller fem mikroliter av varje plasmid som valts ut för nukleofektion.
Efter att ha överfört denna lösning till en kyvett, placera den i nukleofektoranordningen för att nukleofektera cellerna med plasmiderna med hjälp av det optimerade neurala stamcellsprogrammet i nukleofektorsystemet. Efter att ha slutfört elektroporationen, använd Pasteur-pipetten som medföljer i satsen, för försiktigt in varmt komplett medium i kyvetten. Överför innehållet i kyvetten till den tidigare förberedda T25-kolven som innehåller förvärmt komplett medium.
Inkubera de nukleofekterade cellerna i en fuktad inkubator vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid i tre till fem dagar och visualisera de nukleofekterade neurosfärerna.
