In vitro induktion av patogena Th17-celler i naiva CD4⁺ T-celler hos möss

För att börja, ta bort PBS från den förbelagda 24-hålsplattan. Återsuspendera de berikade CD4+T-cellerna från mjälten från möss i Th17-cellodlingsmediet och fördela dem i olika brunnar på en 24-hålsplatta som är förbelagda med anti-CD3. Tillsätt Th0-cellodlingsmedium, klassiskt icke-patogent Th17-odlingsmedium och klassiskt patogent Th17-odlingsmedium för kontrast i plattans återstående brunnar.

Tillsätt en mikroliter anti-CD28-lösning till varje brunn. Odla cellerna i en inkubator med 5 % koldioxid vid 37 grader Celsius i fem dagar. På dag två, byt ut hälften av supernatanten i cellkulturen mot ett nytt odlingsmedium.

Observera cellerna under ett optiskt mikroskop på dag fem. Samla cellsupernatanterna från varje grupp och kryokonservera dem vid 80 grader Celsius. Naiva CD4+T-celler odlades med Th0-medium och Th17-differentieringsmedium under fem dagar, vilket resulterade i att T-celler visade klustertillväxt i båda medierna.

Flödescytometrianalys avslöjade att 90 % av naiva CD4+T-celler framgångsrikt differentierades till patogena Th17-celler under stimulering av ett nytt Th17-cellodlingsmedium.