Patojenik Th17 Hücrelerinin Farelerin Naif CD4 ⁺ T-Hücrelerine İn Vitro İndüksiyonu

Başlamak için, PBS'yi önceden kaplanmış 24 oyuklu plakadan çıkarın. Th17 hücre kültürü ortamında zenginleştirilmiş fare splenic naif CD4 + T hücrelerini yeniden süspanse edin ve anti-CD3 ile önceden kaplanmış 24 oyuklu bir plakanın farklı oyuklarına dağıtın. Plakanın kalan oyuklarına kontrast için Th0 hücre kültürü ortamı, klasik patojenik olmayan Th17 kültür ortamı ve klasik patojenik Th17 kültür ortamı ekleyin.

Her kuyucuğa bir mikrolitre anti-CD28 çözeltisi ekleyin. Hücreleri beş gün boyunca 37 santigrat derecede% 5'lik bir karbondioksit inkübatörde kültürleyin. İkinci günde, hücre kültürü süpernatan ortamının yarısını taze kültür ortamı ile değiştirin.

Beşinci günde hücreleri optik mikroskop altında gözlemleyin. Her gruptan hücre süpernatantlarını toplayın ve bunları 80 santigrat derecede dondurarak saklayın. Naif CD4+T hücreleri, beş gün boyunca Th0 besiyeri ve Th17 farklılaşma besiyeri ile kültürlendi, bu da T hücrelerinin her iki ortamda küme büyümesi göstermesine neden oldu.

Akış sitometrisi analizi, naif CD4+T hücrelerinin %90'ının, yeni bir Th17 hücre kültürü ortamının uyarılması altında başarılı bir şekilde patojenik Th17 hücrelerine farklılaştığını ortaya koydu.