För att börja, tina passagen, en human vit subkutan preadipocyt, och tillsätt cellerna i en T75-kolv som innehåller 12 till 15 milliliter varmt preadipocyttillväxtmedium-2. Efter att cellerna uppnått 90% sammanflöde, tvätta dem med PBS och inkubera dem med en milliliter 0,25% Trypsin-EDTA-lösning i två minuter. Använd ett ljusmikroskop för att bekräfta cellavlossningen och tillsätt 23 milliliter preadipocyttillväxtmedia-2 till cellerna.
Dispensera en milliliter cellsuspension i varje brunn på en 24-brunns samkulturplatta och inkubera plattan för att uppnå cellsammanflöde. Byt sedan ut mediet mot en milliliter preadipocytdifferentieringsmedium och inkubera vid 37 grader celsius med 5 % koldioxid i 10 dagar. På dag sex av differentiering, så fem gånger 10 upphöjt till kraften av fyra humana SAT MVEC:er i 500 mikroliter komplett MVEC-odlingsmedia på en transwell-insats.
Placera insatsen i en brunn som innehåller 500 mikroliter komplett MVEC-odlingsmedia och inkubera vid 37 grader Celsius med 5 % koldioxid. På dag 10, när adipocyterna är helt differentierade, ta bort hälften av media från varje brunn och överför transwellinsatserna som innehåller konfluence SAT MVEVs till varje brunn. Inkubera plattan i 24 timmar för att få en samkultur.
I takt med att de humana subkutana vita preadipocyterna blir mer differentierade kan utvecklingen av lipidvakuoler märkas.
