Para comenzar, coloque una bolsa sellada que contenga perlas fijas de lectina secas congeladas en un banco a temperatura ambiente. Coloque un paño antiestático sobre el escritorio y luego coloque el eliminador de estática portátil frente al espacio de trabajo. Con pinzas antiestáticas, inserte las cuentas en una punta vacía de modo que se coloquen dos cuentas espaciadoras entre las cuentas fijas de lectina.
Use pinzas para apretar suavemente la parte superior de la punta y cerrar la abertura. Enderezar manualmente la punta si está doblada. Luego guárdelo en una bolsa sellada con un desecante a cuatro grados centígrados hasta que lo necesite.
Agregue aproximadamente 10 microlitros de la solución de proteína de analito a un tubo que contenga 10 microgramos de reactivo de biotinilación seco. Agita la mezcla para que se mezcle bien. A continuación, centrifugarlo a 1000 G durante cinco segundos a temperatura ambiente.
Incuba los tubos durante una hora a temperatura ambiente, lejos de la luz. Ahora agregue 90 microlitros de tampón de sondeo a las muestras para diluirlo diez veces antes de incubar. Abra la puerta frontal del dispositivo automatizado de medición de reacciones.
Transfiera los depósitos de líquido, las puntas preparadas y los analitos a las posiciones designadas en el dispositivo. Encienda el interruptor de encendido de la unidad principal de un dispositivo de medición de reacción automatizado. Toque el botón Iniciar diagnóstico que se muestra en la pantalla.
Presione Ensayo en la pantalla de inicio para seleccionar el protocolo. Ahora seleccione la opción BAssaySTD del método de ensayo y presione Siguiente. Introduzca los nombres de los ejemplos y pulse Siguiente.
A continuación, introduzca los nombres de las propinas y vuelva a pulsar Siguiente. Confirme las notas de la derecha y, a continuación, pulse Iniciar para comenzar la medición. Confirme el cambio de pantalla al modo de ejecución y espere hasta que se resalte la flecha Finalizar.
La pantalla cambiará al modo de resultado cuando se complete la medición. Inserte una memoria USB en el puerto situado en el lateral de la unidad principal. Presione Exportar en el modo de resultados para guardar los datos como un archivo CSV para un análisis posterior de datos y gráficos individuales en Excel.
Se observó una clara diferencia en el patrón de unión de las lectinas frente a los 12 azúcares de poliacrilamida. Los productos proteicos purificados que se sometieron a la medición de la punta mostraron una mayor reactividad de ciertas lectinas a los sacáridos.
