للبدء ، احصل على الشريحة المثبتة على العينة بعد تقادمها. لمعالجة الشريحة مسبقا ، قم بغمسها بشكل متسلسل في مرطبانات كوبلين تحتوي على حلول مناسبة للوقت المحدد. هضم الأنسجة مع 100 إلى 200 ميكرولتر من البروتين K الهضم العازلة ، واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقة واحدة.
لإيقاف الهضم ، اغمر الشريحة على الفور بشكل متسلسل في محاليل الإيثانول لمدة دقيقتين لكل منهما. ضع مزيج تهجين FISH على الشريحة وقم بتغطية العينة بقسيمة غطاء. ضع الشرائح على طبق ساخن ، مثل نظام تهجين Slide Moat عند 75 درجة مئوية لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق.
ثم انقل الشريحة إلى طبق تسخين آخر عند 37 درجة مئوية للتهجين طوال الليل. بعد ذلك ، اغمس الشريحة في المخزن المؤقت للغسيل الدافئ وقم بإزالة قسيمة الغطاء بعناية. اغسل الشريحة وصمة عارها باستخدام الكواشف المناسبة في الظلام.
اغمس الشريحة بسرعة في الماء منزوع الأيونات لمدة لا تزيد عن ثانية واحدة وضعها على منشفة ورقية. بعد التجفيف ، قم بتركيب الشريحة باستخدام وسائط تثبيت مضادة للتلاشي. ضع زلة الغطاء وأغلقها بطلاء الأظافر قبل التصوير.
باستخدام عدسة زيت 60X ، التقط إشارة الفلورسنت في مداخن Z متعددة. أخيرا ، قم بإجراء أقصى إسقاط 3D لتحقيق أفضل دقة وتطبيق deconvolution أو خوارزميات مسح الخلفية الأخرى. في عينات سرطان الثدي السلبية الثلاثية ، تظهر FISH النووية بشكل أساسي نقطتين متميزتين لكل نواة ، تمثلان إشارتي ERBB2 الخاصة بها.
في المقابل ، تعرض العينات الإيجابية HER2 إشارات FISH وفيرة ، مما يشير إلى أنماط مختلفة من تضخيم الجينات. بالإضافة إلى ذلك ، قد تظهر بعض النوى في العينات الإيجابية HER2 مجموعات ، مما يشير إلى وجود محاور DNA كروموسومية إضافية ، والتي تعد نقاط محورية لزيادة تضخيم الجينات.
