Verkrijg om te beginnen het op het monster gemonteerde objectglaasje nadat u het hebt verouderd. Om het objectglaasje voor te behandelen, dompelt u het achtereenvolgens in coplin potten met geschikte oplossingen voor de aangegeven tijd. Vervet het weefsel met 100 tot 200 microliter proteïnase K-verteringsbuffer en incubeer gedurende één minuut bij kamertemperatuur.
Om de vertering te stoppen, dompelt u het objectglaasje onmiddellijk achtereenvolgens gedurende twee minuten onder in ethanoloplossingen. Breng de FISH-hybridisatiemix aan op het objectglaasje en dek het monster af met een afdekglaasje. Plaats de dia's gedurende twee tot vijf minuten op een hete plaat, zoals een Slide Moat-hybridisatiesysteem bij 75 graden Celsius.
Breng de dia vervolgens over op een andere kookplaat die is ingesteld op 37 graden Celsius om een nacht te hybridiseren. Dompel vervolgens de dia in de warme wasbuffer en verwijder voorzichtig het afdekglaasje. Was en beits het objectglaasje met de juiste reagentia in het donker.
Dompel de dia snel niet langer dan een seconde in gedeïoniseerd water en leg deze op keukenpapier. Monteer de slede na het drogen met anti-fade montagemedia. Plaats de afdekglaasje en verzegel deze met nagellak voordat u de afbeelding maakt.
Gebruik een 60X olielens om het fluorescerende signaal in meerdere Z-stacks vast te leggen. Voer ten slotte een maximale 3D-projectie uit om de beste resolutie te bereiken en pas deconvolutie of andere algoritmen voor het wissen van de achtergrond toe. In de triple-negatieve borstkankermonsters vertoont nucleaire FISH voornamelijk twee verschillende stippen per kern, die haar twee ERBB2-signalen vertegenwoordigen.
Daarentegen vertonen HER2-positieve monsters overvloedige FISH-signalen, wat wijst op verschillende patronen van genamplificatie. Bovendien kunnen sommige kernen in HER2-positieve monsters clusters vertonen, wat wijst op extra chromosomale DNA-hubs, die brandpunten zijn voor verhoogde genamplificatie.
