Keer om te beginnen 10 milliliter volbloedbuisjes 10 keer voorzichtig om bij kamertemperatuur. Centrifugeer de buizen met behulp van een zwenkbare bakrotor gedurende 10 minuten bij 22 graden Celsius bij 800 g met de rem aan. Plaats de monsters vervolgens in een biologische veiligheidskast en controleer op de drie verschillende lagen.
Label drie polystyreenbuizen van vijf milliliter met de letters A, B en C. Wervel en verzamel één milliliter van de buffy-laag door aspiratie en breng over naar de buis met het label A.Voeg vervolgens 60 microliter 0.1 molaire EDTA toe aan buis A met de buffy-laag. Voeg minstens drie keer 50 microliter van de cocktailmix toe aan de buis A.Pipette op en neer om het te mengen en incubeer gedurende vijf minuten op kamertemperatuur. Voeg daarna 890 microliter PBS toe aan buis A en meng door minstens drie keer te pipetteren.
Draai vervolgens de magnetische kralenbuis gedurende 30 seconden. Voeg 50 microliter van de magnetische kralen toe aan buis A en pipette minstens drie keer om de kralen goed te mengen. Plaats buis A onmiddellijk in de magneetstandaard en incubeer gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur.
Pipetteer vervolgens voorzichtig de verrijkte celsuspensie in buisje B en verzamel de heldere fractie met geen of minimale rode bloedcellen voor optimaal PBMC-herstel. Verwijder daarna buis A van de magneetstandaard en gooi deze weg. Voeg vervolgens 50 microliter magnetische kralen toe aan de celsuspensie in buis B en pipetteer minstens drie keer op en neer.
Plaats buis B onmiddellijk in de magneetstandaard en incubeer gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Pipetteer de verrijkte celsuspensie voorzichtig in buisje C en verzamel alleen de heldere fractie. Verwijder buis B van de magneetstandaard en gooi deze weg.
Plaats vervolgens buis C onmiddellijk in de magneetstandaard en incubeer gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Pipeteer de verrijkte celsuspensie voorzichtig in een gelabelde centrifugebuis en vul aan tot twee milliliter met PBS. Breng 50 microliter van de celsuspensie over in een monsterbeker van de geautomatiseerde cellenteller.
Voeg 450 microliter PBS toe voor een verdunningscelgetal van 1 tot 10.
