まず、10ミリリットルの全血チューブを室温で10回静かに反転させます。スイングバケットローターを使用して、ブレーキをかけた状態でチューブを800gで摂氏22度で10分間遠心分離します。次に、サンプルを生物学的安全キャビネットに入れ、3つの異なる層を確認します。
文字A、B、およびC.Swirlで3つの5ミリリットルのポリスチレンチューブにラベルを付け、吸引によってバフィーコートの1ミリリットルを収集し、A.Thenとしてラベル付けされたチューブに移します。50マイクロリットルのカクテルミックスをチューブA.Pipetteを上下に少なくとも3回加えて混合し、室温で5分間インキュベートします。その後、チューブAに890マイクロリットルのPBSを加え、少なくとも3回ピペッティングして混合します。
次に、磁気ビーズチューブを30秒間ボルテックスします。50マイクロリットルの磁気ビーズをチューブAに加え、少なくとも3回ピペットでビーズを完全に混合します。すぐにチューブAをマグネットスタンドに入れ、室温で5分間インキュベートします。
次に、濃縮された細胞懸濁液をチューブBに慎重にピペットで移し、赤血球を含まない、または最小限の透明な画分を採取して、最適なPBMC回収を実現します。その後、マグネットスタンドからチューブAを取り外して廃棄します。次に、チューブBの細胞懸濁液に50マイクロリットルの磁気ビーズを加え、少なくとも3回上下にピペットで動かします。
すぐにチューブBをマグネットスタンドに入れ、室温で5分間インキュベートします。濃縮された細胞懸濁液をチューブCに慎重にピペットで移し、透明な画分のみを回収します。チューブBをマグネットスタンドから取り外して廃棄します。
その後、すぐにチューブCをマグネットスタンドに入れ、室温で5分間インキュベートします。濃縮した細胞懸濁液を標識された遠心分離チューブに慎重にピペットで移し、PBSを最大2ミリリットルまで補充します。50マイクロリットルの細胞懸濁液を自動セルカウンターのサンプルカップに移します。
450マイクロリットルのPBSを添加して、1〜10希釈の細胞数にします。
