首先,将两个 14 毫升离心管标记为 A 和 B,将一个 15 毫升离心管标记为 C,将一个 15 毫升离心管标记为废液。离心全血后,收集 1 毫升准备好的血沉棕黄层并将其添加到试管 A.向试管 A 中加入 60 微升 0.1 摩尔 EDTA,然后将磁珠管涡旋 30 秒。要打开自动 PBMC 仪器,请打开仪器前部的电源。
在仪器的主屏幕上,选择 Profile(配置文件)并选择所需的方案。然后输入起始体积并对每个样品重复此操作。选择将使用相同试剂盒的所有象限。
接下来,按照自动 PBMC 仪器屏幕上的指示,将标记的消耗品、滤纸吸头和缓冲液容器装入仪器转盘的每个象限。上样完成后,取下耗材和试剂的盖子,然后在仪器屏幕上选择运行。运行完成后,选择 unload and remove samples from the instrument's carous。
将 500 μL 细胞转移到样品杯中,进行免稀释细胞计数。将基于磁珠的自动方法与手动方法进行比较,在细胞活力或总细胞计数方面未发现显著差异。手动方法在 43 分钟内处理了 8 个样品,而自动化方法需要 57 分钟,其中包括 35 分钟的手动处理。
5 天内加工的 PBMC 的平均细胞活力大于 90%,10 天内加工的 PBMC 的平均细胞活力大于 75%。与 24 小时内处理的标本相比,5 天后 PBMC 的平均产量下降了 50%。