For at begynde skal du mærke to 14-milliliters rør som A og B, et 15-milliliters centrifugerør som C og et 15-milliliters centrifugerør som affald. Efter centrifugering af hele blodet opsamles og tilsættes en milliliter af den forberedte buffy coat til rør A.Tilsæt 60 mikroliter 0,1 molar EDTA til rør A.Hvirvl derefter det magnetiske perlerør i 30 sekunder. For at tænde for det automatiserede PBMC-instrument skal du tænde for strømmen foran på instrumentet.
På instrumentets startskærm skal du vælge profile og vælg den ønskede protokol. Indtast derefter startvolumen og gentag for hver sample. Vælg alle de kvadranter, der skal bruge det samme reagenssæt.
Læg derefter mærkede forbrugsstoffer, filterspidser og bufferbeholder i hver kvadrant af instrumentets karrusel som anvist på den automatiske PBMC-instrumentskærm. Når påfyldningen er fuldført, skal du fjerne lågene fra forbrugsvarer og reagenser og vælge kør på instrumentskærmen. Når kørslen er færdig, skal du vælge at fjerne og fjerne samples fra instrumentets karrusel.
Overfør 500 mikroliter af cellerne til en prøvekop for et celletal uden fortynding. Ved sammenligning af den automatiserede perlebaserede metode med den manuelle metode blev der ikke identificeret signifikante forskelle i cellelevedygtighed eller totalt celletal. Den manuelle metode behandlede otte prøver på 43 minutter, mens den automatiserede metode tog 57 minutter, herunder 35 minutters hands-off-behandling.
Gennemsnitlig cellelevedygtighed var større end 90 % for PBMC'er behandlet inden for fem dage og større end 75 % for dem, der blev behandlet inden for 10 dage. Det gennemsnitlige PBMC-udbytte faldt med 50 % efter fem dage sammenlignet med prøver behandlet inden for 24 timer.
