Per iniziare, etichettare due provette da 14 millilitri come A e B, una provetta da centrifuga da 15 millilitri come C e una provetta da centrifuga da 15 millilitri come rifiuti. Dopo aver centrifugato il sangue intero, raccogliere e aggiungere un millilitro del buffy coat preparato alla provetta A.Aggiungere 60 microlitri di EDTA 0,1 molare alla provetta A.Quindi agitare la provetta a perline magnetiche per 30 secondi. Per accendere lo strumento PBMC automatizzato, accendere l'alimentazione nella parte anteriore dello strumento.
Nella schermata iniziale dello strumento, selezionare profile e scegliere il protocollo desiderato. Quindi inserire il volume iniziale e ripetere per ogni campione. Selezionare tutti i quadranti che utilizzeranno lo stesso kit di reagenti.
Successivamente, caricare i materiali di consumo etichettati, i puntali filtranti e il contenitore del tampone in ciascun quadrante del carosello dello strumento come indicato sullo schermo dello strumento PBMC automatizzato. Una volta completato il caricamento, rimuovere i coperchi dai materiali di consumo e dai reagenti e selezionare Esegui sullo schermo dello strumento. Al termine della seduta, selezionare scarica e rimuovi campioni dal carosello dello strumento.
Trasferire 500 microlitri di cellule in una tazza per campioni per una conta cellulare senza diluizione. Confrontando il metodo automatizzato basato su perline con il metodo manuale, non sono state identificate differenze significative nella vitalità cellulare o nella conta totale delle cellule. Il metodo manuale ha elaborato otto campioni in 43 minuti, mentre il metodo automatizzato ha richiesto 57 minuti, inclusi 35 minuti di elaborazione manuale.
La vitalità cellulare media è stata superiore al 90% per le PBMC trattate entro cinque giorni e superiore al 75% per quelle trattate entro 10 giorni. Le rese medie di PBMC sono diminuite del 50% dopo cinque giorni rispetto ai campioni lavorati entro 24 ore.
