For å begynne, merk to 14-milliliters rør som A og B, ett 15-milliliters sentrifugerør som C og ett 15-milliliters sentrifugerør som avfall. Etter sentrifugering av hele blodet, samle og tilsett en milliliter av den tilberedte buffycoaten til rør A.Tilsett 60 mikroliter 0,1 molar EDTA til rør A.Virvel deretter det magnetiske perlerøret i 30 sekunder. For å slå på det automatiserte PBMC-instrumentet, slå på strømmen foran på instrumentet.
På instrumentets startskjerm velger du profile og velg ønsket protokoll. Skriv deretter inn startvolumet og gjenta for hver sample. Velg alle kvadrantene som skal bruke samme reagenssett.
Deretter laster du merkede forbruksvarer, filterspisser og bufferbeholder i hver kvadrant av instrumentets karusell som anvist på den automatiserte PBMC-instrumentskjermen. Når lastingen er fullført, fjern lokkene fra forbruksvarer og reagenser og velg kjør på instrumentskjermen. Når kjøringen er fullført, velg lossing og fjern samples fra instrumentets karusell.
Overfør 500 mikroliter av cellene til en prøvekopp for et celleantall uten fortynning. Ved å sammenligne den automatiserte perlebaserte metoden med den manuelle metoden, ble det ikke identifisert noen signifikante forskjeller i cellelevedyktighet eller totalt celletall. Den manuelle metoden behandlet åtte prøver på 43 minutter, mens den automatiserte metoden tok 57 minutter, inkludert 35 minutter med hands-off-behandling.
Gjennomsnittlig cellelevedyktighet var større enn 90 % for PBMC behandlet innen fem dager og større enn 75 % for de som ble behandlet innen 10 dager. Gjennomsnittlig PBMC-utbytte falt med 50 % etter fem dager sammenlignet med prøver behandlet innen 24 timer.
