Para começar, rotule dois tubos de 14 mililitros como A e B, um tubo de centrífuga de 15 mililitros como C e um tubo de centrífuga de 15 mililitros como resíduo. Depois de centrifugar o sangue total, colete e adicione um mililitro da camada buffy preparada ao tubo A.Adicione 60 microlitros de EDTA 0,1 molar ao tubo A.Em seguida, bata o tubo magnético por 30 segundos. Para ligar o instrumento PBMC automatizado, ligue a alimentação na parte frontal do instrumento.
Na tela inicial do instrumento, selecione profile e escolha o protocolo desejado. Em seguida, insira o volume inicial e repita para cada amostra. Selecione todos os quadrantes que usarão o mesmo kit de reagentes.
Em seguida, carregue consumíveis rotulados, pontas de filtro e recipiente de buffer em cada quadrante do carrossel do instrumento, conforme indicado na tela automatizada do instrumento PBMC. Quando o carregamento estiver concluído, remova as tampas dos consumíveis e reagentes e selecione executar na tela do instrumento. Quando a execução estiver concluída, selecione descarregar e remover amostras do carrossel do instrumento.
Transfira 500 microlitros das células para um copo de amostra para uma contagem de células sem diluição. Comparando o método automatizado baseado em grânulos com o método manual, não foram identificadas diferenças significativas na viabilidade celular ou na contagem total de células. O método manual processou oito amostras em 43 minutos, enquanto o método automatizado levou 57 minutos, incluindo 35 minutos de processamento sem intervenção.
A viabilidade celular média foi superior a 90% para PBMCs processadas em cinco dias e superior a 75% para aquelas processadas em 10 dias. Os rendimentos médios de PBMC diminuíram 50% após cinco dias em comparação com as amostras processadas em 24 horas.
