Till att börja med, märk två 14-milliliters rör som A och B, ett 15-milliliters centrifugrör som C och ett 15-milliliters centrifugrör som avfall. Efter centrifugering av helblod, samla upp och tillsätt en milliliter av den förberedda buffycoaten till röret A. Tillsätt 60 mikroliter 0,1 molar EDTA till röret A.Virvla sedan det magnetiska pärlröret i 30 sekunder. För att slå på det automatiserade PBMC-instrumentet, slå på strömmen på framsidan av instrumentet.
På instrumentets startskärm, välj profile och välj önskat protokoll. Ange sedan startvolymen och upprepa för varje prov. Välj alla kvadranter som ska använda samma reagenssats.
Ladda sedan märkta förbrukningsvaror, filterspetsar och buffertbehållare i varje kvadrant av instrumentets karusell enligt anvisningarna på den automatiserade PBMC-instrumentskärmen. När laddningen är klar, ta bort locken från förbrukningsvaror och reagenser och välj kör på instrumentskärmen. När körningen är klar väljer du ta bort och ta bort samplingar från instrumentets karusell.
Överför 500 mikroliter av cellerna till en provkopp för ett cellantal utan utspädning. Vid en jämförelse mellan den automatiserade pärlbaserade metoden och den manuella metoden identifierades inga signifikanta skillnader i cellviabilitet eller totalt cellantal. Den manuella metoden bearbetade åtta prover på 43 minuter medan den automatiserade metoden tog 57 minuter, inklusive 35 minuters hands-off-bearbetning.
Den genomsnittliga cellviabiliteten var större än 90 % för PBMC som behandlades inom fem dagar och mer än 75 % för de som behandlades inom 10 dagar. Den genomsnittliga PBMC-avkastningen minskade med 50 % efter fem dagar jämfört med prover som bearbetades inom 24 timmar.
