रैखिक डीएनए सब्सट्रेट के दोनों सिरों को कार्यात्मक बनाने के बाद प्रतिक्रिया करने के लिए आगे बढ़ें। सबसे पहले, चार एस -400 स्पिन कॉलम लें और राल को फिर से निलंबित करने के लिए कम से कम 30 सेकंड के लिए उन्हें भंवर दें। फिर, स्टोरेज बफर को हटाने के लिए उन्हें 735G पर एक मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें।
1.5 मिलीलीटर ट्यूबों को साफ करने के लिए कॉलम स्थानांतरित करें। तुरंत, प्रत्येक स्तंभ के लिए दोगुना कार्यात्मक रैखिक डीएनए समाधान के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। अनिगमित न्यूक्लियोटाइड को बनाए रखते हुए कॉलम के माध्यम से डीएनए प्रवाहित करने के लिए 735G पर दो मिनट के लिए कॉलम को सेंट्रीफ्यूज करें।
चार स्तंभों से डीएनए युक्त प्रवाह के माध्यम से एक साथ पूलिंग के बाद, एक विंदुक के साथ मात्रा को मापें. अगला, भंवर एम -280 streptavidin लेपित चुंबकीय मोती 30 सेकंड के लिए उन्हें फिर से निलंबित करने के लिए. एक साफ 1.5 मिलीलीटर ट्यूब के लिए निलंबित चुंबकीय मोती के चार मिलीग्राम स्थानांतरण.
भंडारण बफर को हटाने से पहले मोतियों को इकट्ठा करने के लिए एक मिनट के लिए एक चुंबकीय रैक में ट्यूब रखें. पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर मोतियों सेते से पहले पांच सेकंड के लिए भंवर द्वारा बफर एक के एक मिलीलीटर में मोती resubuild. एक मिनट के लिए एक चुंबकीय धारक में ट्यूब रखकर मोती ले लीजिए.
बफर ए को हटाने के बाद, पाइपिंग द्वारा 2X बफर ए के 400 माइक्रोलीटर में मोतियों को फिर से निलंबित करें। फिर, मोतियों के लिए कार्यात्मक डीएनए समाधान के 400 माइक्रोलीटर जोड़ें, और पाइपिंग द्वारा धीरे से मिश्रण. अंत रोटेशन पर अंत के साथ चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर मनका डीएनए मिश्रण सेते हैं.
अगले दिन, चुंबकीय मोती के लिए बाध्य डीएनए की कुल राशि की गणना से पहले सतह पर तैरनेवाला को हटाने के लिए चुंबकीय रैक का उपयोग करें. फिर, बफर बी और बफर सी के साथ क्रमिक रूप से मोती धो लेंबफर सी के 300 माइक्रोलीटर में मोतियों को फिर से निलंबित करें और चार 75 माइक्रोलीटर एलिकोट बनाएं।
