선형 DNA 기질의 양쪽 말단을 기능화한 후 반응을 진행합니다. 먼저 4개의 S-400 스핀 컬럼을 가져와서 최소 30초 동안 와류시켜 수지를 다시 부유시킵니다. 그런 다음 735G에서 1분 동안 원심분리하여 저장 버퍼를 제거합니다.
컬럼을 옮겨 1.5mL 튜브를 세척합니다. 즉시, 100 마이크로리터의 이중 기능화된 선형 DNA 용액을 각 컬럼에 첨가합니다. 735G에서 2분 동안 컬럼을 원심분리하여 통합되지 않은 뉴클레오티드를 유지하면서 DNA를 컬럼을 통해 흐르게 합니다.
4개의 컬럼에서 DNA를 포함하는 플로우 스루를 함께 모은 후 피펫으로 부피를 측정합니다. 다음으로, 소용돌이 M-280 스트렙타비딘 코팅된 마그네틱 비드를 30초 동안 현탁시킵니다. 4mg의 재현탁 마그네틱 비드를 깨끗한 1.5ml의 튜브에 옮깁니다.
저장 버퍼를 제거하기 전에 튜브를 마그네틱 랙에 1분 동안 넣어 비드를 수집합니다. 비드를 실온에서 5분 동안 배양하기 전에 5초 동안 와류하여 완충액 A 1밀리리터에 비드를 재현탁시킵니다. 튜브를 마그네틱 홀더에 1분 동안 넣어 구슬을 모읍니다.
완충액 A를 제거한 후 피펫팅을 통해 비드를 400마이크로리터의 2X 완충액 A에 재현탁시킵니다. 그런 다음 400 마이크로리터의 기능성 DNA 용액을 비드에 추가하고 피펫팅으로 부드럽게 혼합합니다. 비드 DNA 혼합물을 섭씨 4도에서 밤새 종단 회전으로 배양합니다.
다음 날, 마그네틱 비드에 결합된 DNA의 총량을 계산하기 전에 마그네틱 랙을 사용하여 상층액을 제거합니다. 그런 다음 완충액 B와 완충액 C로 비드를 순차적으로 세척하고 비드를 300 마이크로 리터의 완충액 C에 재현탁시키고 4 개의 75 마이크로 리터 부분 표본을 만듭니다.
