शुरू करने के लिए, एक 75 माइक्रोलीटर विभाज्य डीएनए बाध्य स्ट्रेप्टाविडिन-लेपित चुंबकीय मोती के एक मिलीग्राम युक्त ले लो और चुंबकीय रैक के साथ सतह पर तैरनेवाला हटा दें. लोडिंग बफर के 200 माइक्रोलीटर के साथ मोती धो लें। फिर लोडिंग बफर के 75 माइक्रोलीटर में मोतियों को फिर से निलंबित करें और पाइपिंग द्वारा धीरे से मिलाएं।
इसके बाद, मनका बाध्य डीएनए के लिए 37.5 नैनोमोलर की एक अंतिम एकाग्रता पर मूल मान्यता परिसर जोड़ने के लिए और 800 प्रति मिनट आंदोलन के साथ 30 डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए प्रतिक्रिया सेते हैं. 50 नैनोमोलर की अंतिम एकाग्रता में सीडीसी 6 जोड़ें और प्रतिक्रिया को इनक्यूबेट करें जैसा कि पहले दिखाया गया था। फिर 100 नैनोमोलर की अंतिम एकाग्रता में एमसीएम 2-7 सीडीटी 1 जोड़ें और पहले दिखाए गए अनुसार 20 मिनट के लिए प्रतिक्रिया को इनक्यूबेट करें।
उसके बाद, 100 नैनोमोलर की अंतिम एकाग्रता में डीडीके जोड़ें और 30 मिनट के लिए इसी तरह सेते हैं। सतह पर तैरनेवाला हटाने के बाद, उच्च नमक धोने बफर के 200 माइक्रोलीटर के साथ फॉस्फोराइलेटेड एमसीएम-2-7 हेक्सामर्स युक्त मनका बाध्य डीएनए धो लें. पाइपिंग द्वारा मिलाएं, यह सुनिश्चित करना कि मोती पूरी तरह से निलंबित हैं।
अगला, बफर निकालें और सीएमजी बफर के 200 माइक्रोलीटर के साथ एक बार मोती धो लें। इकट्ठा करने और मनका बाध्य डीएनए पर फ्लोरोसेंटली लेबल सीएमजी को सक्रिय करने के लिए, सीएमजी बफर को हटाने और पांच millimolar एडीपी के साथ पूरक सीएमजी बफर के 50 microलीटर में डीएनए बाध्य मोती respended. इसके बाद, स्क्रीन पर उल्लिखित सभी घटकों को एक ट्यूब में मिलाएं और इसे बर्फ पर रखें।
तुरंत प्रोटीन मिश्रण करने के लिए मनका बाध्य डीएनए resuspended जोड़ें. 800 आरपीएम आंदोलन के साथ 30 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए प्रतिक्रिया सेते हैं. मनका क्रमिक रूप से एचएसडब्ल्यू बफर और सीएमजी बफर के साथ धो लें।
बफर को हटाने के बाद, क्षालन बफर के 200 माइक्रोलीटर में डीएनए बाध्य चुंबकीय मोती युक्त सीएमजी को फिर से निलंबित करें, फिर 800 आरपीएम आंदोलन के साथ एक घंटे के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें। ट्यूब को चुंबकीय रैक में रखें और मोतियों को पांच मिनट के लिए एकत्र करने की अनुमति दें। ध्यान से बसे मोतियों को बाधित किए बिना eluted डीएनए-सीएमजी परिसरों युक्त सतह पर तैरनेवाला इकट्ठा और यह एक नई ट्यूब के लिए हस्तांतरण.
यह सुनिश्चित करने के लिए कि कोई मोती समाधान में रहते हैं, एक चुंबकीय रैक में फिर से एकत्रित सतह पर तैरनेवाला जगह है और ध्यान से एक और पांच मिनट के लिए रखना. सतह पर तैरनेवाला ले लीजिए और एक नई ट्यूब के लिए हस्तांतरण. सतह पर तैरनेवाला के 200 माइक्रोलीटर के लिए सीएमजी बफर के 1, 400 माइक्रोलीटर जोड़ें।
नमूना अब एकल अणु इमेजिंग के लिए तैयार है.
