Effectuez l’imagerie d’une molécule unique dans une configuration commerciale, en combinant une pince optique à double faisceau avec une microscopie confocale. Utilisez le canal d’injection un pour le piégeage des billes, le canal deux pour la liaison du complexe protéique de l’ADN, le canal trois pour vérifier la présence de CMG et les canaux quatre et cinq comme réservoirs de protéines et lieux d’échange de tampons. Versez toutes les solutions dans la cellule d’écoulement à une pression constante de 0,5 bar dans l’orifice d’injection.
Coupez ensuite le débit dans les canaux quatre et cinq. Après avoir initialement écoulé toutes les solutions, réduisez la pression à 0,2 bar. Déplacez les lasers de piégeage pour en canaliser un jusqu’à ce qu’une perle soit prise dans chaque piège optique.
Déplacez les perles piégées vers le canal deux en déplaçant le joystick tout en appuyant sur la gâchette. À l’aide du joystick sans appuyer sur le baliste, un complexe d’ADN CMG en déplaçant la perle droite vers et loin de la perle gauche jusqu’à ce qu’une attache d’ADN soit piégée. Déplacez les perles vers le canal trois et arrêtez immédiatement l’écoulement dans tous les canaux.
Ajustez la puissance laser de 561 nanomètres à quatre microwatts dans le panneau laser d’excitation, puis effectuez un balayage d’essai d’une image de l’ADN dans le canal trois. S’il est présent, CMG apparaîtra sous forme de points limités par la diffraction bidimensionnelle. Dans ce cas, déplacez le câble d’ADN sur le canal quatre ou cinq pour l’imagerie.
Sinon, réactivez le flux, jetez les perles et répétez les étapes. Dans les canaux quatre ou cinq, entrez deux piconewtons dans le panneau de spectroscopie de force, et cliquez sur le bouton d’activation pour démarrer une pince de force. Une fois que la tension initiale atteint deux piconewtons, désactivez la pince de force avant l’imagerie en cliquant à nouveau sur le bouton d’activation dans le panneau de spectroscopie de force.
Cliquez sur le bouton Démarrer la numérisation dans le panneau de numérisation de l’image. Imagez la CMG fluorescente toutes les cinq secondes avec un laser de 561 nanomètres à une puissance de quatre microwatts mesurée à l’objectif. Dans une réaction sans agrégation, CMG est apparu comme des taches discrètes, symétriques limitées en diffraction et peu encombrantes de l’ADN.
Au contraire, les agrégats sont moins discrets, parfois des taches asymétriques entament une plus grande longueur d’ADN. Si le test était exécuté avec succès et que la haute pureté des protéines purifiées était atteinte, un mouvement à longue portée de CMG en présence d’ATP pouvait être observé.
