Realize a imagem de molécula única em uma configuração comercial, combinando pinças ópticas de feixe duplo com microscopia confocal. Use o canal de injeção um para captura de esferas, o canal dois para ligação de complexos de proteínas de DNA, o canal três para verificar a presença de CMG e os canais quatro e cinco como reservatórios de proteínas e locais de troca de tampão. Flua todas as soluções para a célula de fluxo a uma pressão constante de 0,5 bar na porta de injeção.
Em seguida, desligue o fluxo nos canais quatro e cinco. Depois de fluir inicialmente todas as soluções, reduza a pressão para 0,2 bar. Mova os lasers de captura para o canal um até que uma conta seja capturada em cada armadilha óptica.
Mova as contas presas para o canal dois movendo o joystick enquanto pressiona o gatilho. Usando o joystick sem pressionar o gatilho, pesque um complexo de DNA CMG movendo o cordão direito para perto e para longe do cordão esquerdo até que uma corda de DNA fique presa. Mova as contas para o canal três e pare imediatamente o fluxo em todos os canais.
Ajuste a potência do laser de 561 nanômetros para quatro microwatts no painel de laser de excitação e, em seguida, faça uma varredura de teste de um quadro do DNA no canal três. Se presente, o CMG aparecerá como pontos limitados de difração bidimensional. Nesse caso, mova a corda de DNA para o canal quatro ou cinco para obter imagens.
Caso contrário, ligue o fluxo novamente, descarte as contas e repita as etapas. Nos canais quatro ou cinco, insira dois piconewtons no painel de espectroscopia de força e clique no botão habilitar para iniciar uma pinça de força. Quando a tensão inicial atingir dois piconewtons, desative o grampo de força antes da imagem clicando novamente no botão de ativação no painel de espectroscopia de força.
Clique no botão Iniciar digitalização no painel de digitalização de imagem. Imagem fluorescente CMG a cada cinco segundos com um laser de 561 nanômetros a uma potência de quatro microwatts, conforme medido na objetiva. Em uma reação livre de agregação, o CMG apareceu como pontos limitados por difração discreta e simétrica que aglomeravam esparsamente o DNA.
Pelo contrário, os agregados são menos discretos, às vezes bolhas assimétricas que ocupam um comprimento maior do DNA. Se o ensaio fosse executado com sucesso e a alta pureza das proteínas purificadas fosse alcançada, o movimento de longo alcance do CMG na presença de ATP poderia ser observado.
