Begynd med at forberede et Pseudomonas aeruginosa-infektionslager af kendte kolonidannende enheder pr. milliliter før infektion. For at pelletere infektionsfonden centrifugeres ved 10.000 x g i fem minutter ved stuetemperatur. Opslæm pillen i PBS.
Forbered derefter tre en milliliter mikrofugerør indeholdende enten sterilt destilleret vand, ethanol eller steril PBS. Undersøg en steril 100 mikroliter Hamilton-sprøjte, og sørg for, at nålespidsen er skarp og ikke har udviklet en krog, der kan forårsage betydeligt traume på infektionsstedet. Vask nu sprøjten sekventielt med destilleret vand, ethanol og PBS før infektioner, træk op og kasser den maksimale kapacitet.
Hvirvel derefter det resuspenderede infektionsinokulum og træk maksimalt 100 mikroliter op i Hamilton-sprøjten, der er tilstrækkeligt til at injicere 10 mikroliter pr. larve. Derefter injiceres hver Galleria mellonella-larve med 10 mikroliter inokulum i det bageste højre ben. Inkuber de inficerede larver mellem 20 grader Celsius og 42 grader Celsius, hvilket er et passende interval for Galleria mellonella-overlevelse.
Der fremstilles et bredt doser, der overstiger det forventede terapeutiske interval for det antimikrobielle middel på grundlag af in vitro-toksicitetsdata. Injicer sunde, sterile Galleria mellonella i passende gruppestørrelser med de forskellige koncentrationer af antimikrobielle stoffer og PBS-vehikel. For at optimere behandlingen af bakteriel infektion i Galleria mellonella skal du forberede et passende udvalg af antimikrobielle doser baseret på foreløbig toksicitetstest.
Inficer grupper af larver med bakterier som tidligere beskrevet to timer efter infektion. Larverne behandles med det tilberedte antimikrobielle middel eller vehikelkontrolopløsning. Overvåg Galleria mellonella-overlevelse med 30 minutters intervaller eller hyppigere fra det tidspunkt, hvor dødeligheden normalt observeres første gang.
Fjern eventuelle døde larver og noter deres dødstidspunkt. For at sammenligne, hvordan tidspunktet for behandlingen påvirker dødeligheden, skal du behandle larverne 2, 4, 6, 9 eller 12 timer efter infektion og overvåge deres overlevelse med et 30 minutters interval. Den effektive dosis af tobramycin varierede efter stamme.
Fem milligram pr. kilogram var optimalt for PAO1 og PA14,2,5 milligram pr. kilogram for PAK og 10 milligram pr. kilogram for IST27-mucoid. Ingen dosis var effektiv for LESB58. Behandling med fem milligram pr. kg tobramycin to, fire og seks timer efter infektion resulterede i over 50 % overlevelse af Plasmodium aeruginosa-inficerede Galleria mellonella-larver.
