Begin met het voorbereiden van een Pseudomonas aeruginosa-infectievoorraad van bekende kolonievormende eenheden per milliliter voorafgaand aan de infectie. Om de infectievoorraad te pelleteren, centrifugeert u gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur bij 10.000 x g. Resuspendeer de pellet in PBS.
Maak vervolgens drie microfuge-buisjes van één milliliter klaar met steriel gedestilleerd water, ethanol of steriel PBS. Inspecteer een steriele Hamilton-spuit van 100 microliter en zorg ervoor dat de punt van de naald scherp is en geen haak heeft ontwikkeld die aanzienlijk trauma aan de infectieplaats zou kunnen veroorzaken. Was de spuit nu achtereenvolgens met gedestilleerd water, ethanol en PBS voorafgaand aan infecties, waarbij u de maximale capaciteit optrekt en weggooit.
Draai vervolgens het geresuspendeerde infectie-inoculum en zuig maximaal 100 microliter op in de Hamilton-spuit, voldoende om 10 microliter per larve te injecteren. Injecteer daarna elke larve van Galleria mellonella met 10 microliter inoculum in het rechter achterpoot. Incubeer de geïnfecteerde larven tussen 20 graden Celsius en 42 graden Celsius, wat een geschikt bereik is voor de overleving van Galleria mellonella.
Bereid een breed scala aan doses voor die het verwachte therapeutische bereik van het antimicrobiële middel overschrijden, op basis van in-vitrotoxiciteitsgegevens. Injecteer gezonde, steriele Galleria mellonella in de juiste groepsgroottes met de verschillende antimicrobiële en PBS-mediumconcentraties. Om de behandeling van bacteriële infectie in Galleria mellonella te optimaliseren, bereidt u een geschikte reeks doses antimicrobiële middelen voor op basis van voorlopige toxiciteitstests.
Infecteer groepen larven met bacteriën zoals eerder beschreven twee uur na infectie. Behandel de larven met het bereide antimicrobiële middel of de vochthiculumbestrijdingsoplossing. Bewaak de overleving van Galleria mellonella met tussenpozen van 30 minuten of vaker vanaf het tijdstip waarop de sterfte gewoonlijk voor het eerst wordt waargenomen.
Verwijder eventuele dode larven en noteer hun tijdstip van overlijden. Om te vergelijken hoe de timing van de behandeling de mortaliteit beïnvloedt, behandelt u de larven 2, 4, 6, 9 of 12 uur na infectie en controleert u hun overleving met een interval van 30 minuten. De effectieve dosis tobramycine varieerde per stam.
Vijf milligram per kilogram was optimaal voor PAO1 en PA14.2.5 milligram per kilogram voor PAK en 10 milligram per kilogram voor IST27-slijmvlies. Geen enkele dosis was effectief voor LESB58. Behandeling met vijf milligram per kilogram tobramycine twee, vier en zes uur na infectie resulteerde in meer dan 50%overleving van met Plasmodium aeruginosa geïnfecteerde Galleria mellonella-larven.
