संक्रमण से पहले प्रति मिलीलीटर ज्ञात कॉलोनी बनाने इकाइयों के एक स्यूडोमोनास एरुगिनोसा संक्रमण स्टॉक तैयार करके शुरू करें। संक्रमण स्टॉक को गोली देने के लिए, कमरे के तापमान पर पांच मिनट के लिए 10, 000 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र। पीबीएस में गोली को फिर से निलंबित करें।
अगला, तीन एक मिलीलीटर माइक्रोफ्यूज ट्यूब तैयार करें जिसमें या तो बाँझ आसुत जल, इथेनॉल, या बाँझ पीबीएस शामिल हैं। एक बाँझ 100 माइक्रोलीटर हैमिल्टन सिरिंज का निरीक्षण करें, यह सुनिश्चित करना कि सुई की नोक तेज है और एक हुक विकसित नहीं किया है जो संक्रमण स्थल पर महत्वपूर्ण आघात पैदा कर सकता है। अब संक्रमण से पहले आसुत जल, इथेनॉल, और पीबीएस के साथ क्रमिक रूप से सिरिंज धो लें, अधिकतम क्षमता को खींचना और त्यागना।
फिर भंवर पुन: निलंबित संक्रमण इनोकुलम और हैमिल्टन सिरिंज में अधिकतम 100 माइक्रोलीटर खींचते हैं जो प्रति लार्वा 10 माइक्रोलीटर इंजेक्ट करने के लिए पर्याप्त है। बाद में, प्रत्येक गैलेरिया मेलोनेला लार्वा को रियर राइट प्रोलेग में इनोकुलम के 10 माइक्रोलीटर के साथ इंजेक्ट करें। संक्रमित लार्वा को 20 डिग्री सेल्सियस और 42 डिग्री सेल्सियस के बीच इनक्यूबेट करें, जो गैलेरिया मेलोनेला के जीवित रहने के लिए एक उपयुक्त सीमा है।
इन विट्रो विषाक्तता डेटा द्वारा निर्देशित रोगाणुरोधी एजेंट की अपेक्षित चिकित्सीय सीमा से अधिक खुराक की एक विस्तृत श्रृंखला तैयार करें। विभिन्न रोगाणुरोधी और पीबीएस वाहन सांद्रता के साथ उपयुक्त समूह आकारों में स्वस्थ, बाँझ गैलेरिया मेलोनेला इंजेक्ट करें। गैलेरिया मेलोनेला में जीवाणु संक्रमण के उपचार का अनुकूलन करने के लिए, प्रारंभिक विषाक्तता परीक्षण के आधार पर रोगाणुरोधी एजेंट खुराक की एक उपयुक्त श्रृंखला तैयार करें।
बैक्टीरिया के साथ लार्वा के समूहों को संक्रमित करें जैसा कि पहले संक्रमण के दो घंटे बाद वर्णित किया गया था। तैयार रोगाणुरोधी एजेंट या वाहन नियंत्रण समाधान के साथ लार्वा का इलाज करें। गैलेरिया मेलोनेला के जीवित रहने की निगरानी 30 मिनट के अंतराल पर या उस समय से अधिक बार करें जिस पर मृत्यु दर आमतौर पर पहली बार देखी जाती है।
किसी भी मृत लार्वा को हटा दें और उनकी मृत्यु का समय रिकॉर्ड करें। उपचार का समय मृत्यु दर को कैसे प्रभावित करता है, इसकी तुलना करने के लिए, संक्रमण के 2, 4, 6, 9 या 12 घंटे बाद लार्वा का इलाज करें और 30 मिनट के अंतराल पर उनके अस्तित्व की निगरानी करें। टोब्रामाइसिन की प्रभावी खुराक तनाव से भिन्न होती है।
PAO1 और PA14.2.5 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम PAK के लिए पांच मिलीग्राम प्रति किलोग्राम और IST27 म्यूकोइड के लिए 10 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम इष्टतम था। LESB58 के लिए कोई खुराक प्रभावी नहीं थी। संक्रमण के दो, चार और छह घंटे बाद पांच मिलीग्राम प्रति किलोग्राम टोब्रामाइसिन के साथ उपचार के परिणामस्वरूप प्लास्मोडियम एरुगिनोसा संक्रमित गैलेरिया मेलोनेला लार्वा का 50% से अधिक जीवित रहना पड़ा।
