감염 전에 밀리리터당 알려진 콜로니 형성 단위의 녹농균 감염 재고를 준비하는 것으로 시작합니다. 감염 주식을 펠릿하기 위하여는, 실내 온도에 10, 000 x g에 5 분 동안 분리기. PBS에서 펠릿을 재현탁시킵니다.
다음으로, 멸균 증류수, 에탄올 또는 멸균 PBS가 포함된 1밀리리터 마이크로프리지 튜브 3개를 준비합니다. 멸균된 100마이크로리터 Hamilton 주사기를 검사하여 바늘 끝이 날카롭고 감염 부위에 심각한 외상을 유발할 수 있는 고리가 생기지 않았는지 확인합니다. 이제 감염 전에 증류수, 에탄올 및 PBS로 주사기를 순차적으로 세척하여 최대 용량을 끌어 올리고 버립니다.
그런 다음 재현탁 감염 접종물을 소용돌이치게 하고 유충당 10마이크로리터를 주입하기에 충분한 최대 100마이크로리터를 Hamilton 주사기에 끌어들입니다. 그 후, 각 Galleria mellonella 유충에 뒤쪽 오른쪽 앞다리에 10 마이크로리터의 접종물을 주입합니다. 감염된 유충을 섭씨 20도에서 42도 사이에서 배양시키는데, 이는 Galleria mellonella 생존에 적합한 범위입니다.
시험관 내 독성 데이터에 의해 안내되는 항균제의 예상 치료 범위를 초과하는 광범위한 용량을 준비합니다. 건강하고 멸균된 Galleria mellonella를 다양한 항균 및 PBS 차량 농도의 적절한 그룹 크기로 주입합니다. Galleria mellonella에서 세균 감염 치료를 최적화하려면 예비 독성 테스트를 기반으로 적절한 범위의 항균제 용량을 준비하십시오.
감염 후 2시간 후에 이전에 설명한 대로 유충 그룹을 박테리아로 감염시킵니다. 준비된 항균제 또는 차량 제어 용액으로 유충을 처리하십시오. Galleria mellonella의 생존을 30분 간격으로 모니터링하거나 일반적으로 사망률이 처음 관찰되는 시간부터 더 자주 모니터링합니다.
죽은 유충을 제거하고 사망 시간을 기록하십시오. 치료 시기가 사망률에 미치는 영향을 비교하려면 감염 후 2, 4, 6, 9 또는 12시간에 유충을 치료하고 30분 간격으로 유충의 생존을 모니터링합니다. 토브라마이신의 효과적인 투여량은 균주에 따라 다양했다.
PAO1 및 PA14.2.5 밀리그램의 경우 킬로그램당 5밀리그램이 최적이었고, PAK의 경우 킬로그램당 10밀리그램, IST27 점액의 경우 킬로그램당 10밀리그램이었다. LESB58에 대한 투여량은 효과적이지 않았다. 감염 후 2시간, 4시간, 6시간에 토브라마이신을 kg당 5mg씩 투여한 결과, 녹농균에 감염된 Galleria mellonella 유충의 생존율이 50% 이상이었습니다.
