Enfeksiyondan önce mililitre başına bilinen koloni oluşturan birimlerden oluşan bir Pseudomonas aeruginosa enfeksiyon stoğu hazırlayarak başlayın. Enfeksiyon stoğunu peletlemek için, oda sıcaklığında beş dakika boyunca 10.000 x g'da santrifüjleyin. Peletleri PBS'de yeniden askıya alın.
Daha sonra, steril damıtılmış su, etanol veya steril PBS içeren üç adet bir mililitrelik mikrofüj tüpü hazırlayın. Steril bir 100 mikrolitrelik Hamilton şırıngasını inceleyin, iğne ucunun keskin olduğundan ve enfeksiyon bölgesinde önemli travmaya neden olabilecek bir kanca geliştirmediğinden emin olun. Şimdi şırıngayı enfeksiyonlardan önce damıtılmış su, etanol ve PBS ile sırayla yıkayın, maksimum kapasiteyi çizin ve atın.
Daha sonra yeniden askıya alınan enfeksiyon aşısını girdaplayın ve larva başına 10 mikrolitre enjekte etmeye yetecek kadar Hamilton şırıngasına maksimum 100 mikrolitre çekin. Daha sonra, her bir Galleria mellonella larvasına sağ arka prolegde 10 mikrolitre inokülum enjekte edin. Enfekte larvaları, Galleria mellonella'nın hayatta kalması için uygun bir aralık olan 20 santigrat derece ile 42 santigrat derece arasında kuluçkaya yatırın.
İn vitro toksisite verileri tarafından yönlendirilen antimikrobiyal ajanın beklenen terapötik aralığını aşan geniş bir doz aralığı hazırlayın. Sağlıklı, steril Galleria mellonella'yı farklı antimikrobiyal ve PBS araç konsantrasyonları ile uygun grup boyutlarında enjekte edin. Galleria mellonella'daki bakteriyel enfeksiyonun tedavisini optimize etmek için, ön toksisite testine dayalı olarak uygun bir antimikrobiyal ajan dozu aralığı hazırlayın.
Larva gruplarını, enfeksiyondan iki saat sonra daha önce tarif edildiği gibi bakterilerle enfekte edin. Larvaları hazırlanan antimikrobiyal ajan veya araç kontrol solüsyonu ile tedavi edin. Galleria mellonella sağkalımını 30 dakikalık aralıklarla veya mortalitenin genellikle ilk gözlendiği zamandan itibaren daha sık izleyin.
Ölü larvaları çıkarın ve ölüm zamanlarını kaydedin. Tedavi zamanlamasının mortaliteyi nasıl etkilediğini karşılaştırmak için, larvaları enfeksiyondan 2, 4, 6, 9 veya 12 saat sonra tedavi edin ve 30 dakikalık aralıklarla hayatta kalmalarını izleyin. Etkili tobramisin dozu suşa göre değişmiştir.
Kilogram başına beş miligram PAO1 ve PA için optimaldi.14.2.5 PAK için kilogram başına miligram ve IST27 mukoid için kilogram başına 10 miligram. LESB58 için hiçbir doz etkili değildi. Enfeksiyondan iki, dört ve altı saat sonra kilogram tobramisin başına beş miligram ile tedavi, Plasmodium aeruginosa ile enfekte Galleria mellonella larvalarının% 50'den fazla hayatta kalmasına neden oldu.
