Name: xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo
Uploaded: 2010-07-11T19:00:00
Duration: 15 min 42 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo at JoVE.com

העבודה נתמכה על ידי מענקי Helse ובכפוף Rehabilitering (JLB), נורווגית המועצה למחקר (GH ו JCG) של אוניברסיטת אוסלו (NK ו JCG).

<ol>
	<li>Wichterle, H., Lieberam, I., Porter, J. A., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+embryonic+stem+cells+into+motor+neurons.">Directed differentiation of embryonic stem cells into motor neurons.</a> Cell. 110, 385-397 (2002).</li><li>Sigurjonsson, O. E., Perreault, M. C., Egeland, T., Glover, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+human+hematopoietic+stem+cells+produce+neurons+efficiently+in+the+regenerating+chicken+embryo+spinal.">Adult human hematopoietic stem cells produce neurons efficiently in the regenerating chicken embryo spinal.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 5227-5232 (2005).</li><li>Pochampally, R. R., Neville, B. T., Schwarz, E. J., Li, M. M., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+adult+stem+cells+(marrow+stromal+cells)+engraft+and+differentiate+in+chick+embryos+without+evidence+of+cell+fusion.">Rat adult stem cells (marrow stromal cells) engraft and differentiate in chick embryos without evidence of cell fusion.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 9282-9285 (2004).</li><li>Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+embryonic+stem+cells+to+the+chick+embryo.">Transplantation of human embryonic stem cells to the chick embryo.</a> Methods Mol. Biol. 331, 137-151 (2006).</li><li>Lee, H., Shamy, G. A., Elkabetz, Y., Schofield, C. M., Harrsion, N. L., Panagiotakos, G., Socci, N. D., Tabar, V., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+and+transplantation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+motoneurons.">Directed differentiation and transplantation of human embryonic stem cell-derived motoneurons.</a> Stem Cells. 25, 1931-1939 (2007).</li><li>Wichterle, H., Peljto, M., Nedelec, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenotransplantation+of+embryonic+stem+cell-derived+motor+neurons+into+the+developing+chick+spinal+cord.">Xenotransplantation of embryonic stem cell-derived motor neurons into the developing chick spinal cord.</a> Methods Mol. Biol. 482, 171-183 (2009).</li><li>Westerlund, U., Svensson, M., Moe, M. C., Varghese, M., Gustavsson, B., Wallstedt, L., Berg-Johnsen, J., Langmoen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopically+harvested+stem+cells:+a+putative+method+in+future+autotransplantation.">Endoscopically harvested stem cells: a putative method in future autotransplantation.</a> Neurosurgery. 57, 779-784 (2005).</li><li>Boquest, A. C., Shahdadfar, A., Brinchmann, J. E., Collas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+stromal+stem+cells+from+human+adipose+tissue.">Isolation of stromal stem cells from human adipose tissue.</a> Methods Mol. Biol. 325, 35-46 (2006).</li><li>Smeland, E. B., Funderud, S., Kvalheim, G., Gaudernack, G., Rasmussen, A. M., Rusten, L., Wang, M. Y., Tindle, R. W., Blomhoff, H. K., Egeland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+human+hematopoietic+progenitor+cells:+an+effective+method+for+positive+selection+of+CD34++cells.">Isolation and characterization of human hematopoietic progenitor cells: an effective method for positive selection of CD34+ cells.</a> Leukemia. 6, 845-852 (1992).</li><li>Zhang, X. Y., La Russa, V. F., Bao, L., Kolls, J., Schwarzenberger, P., Reiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lentiviral+vectors+for+sustained+transgene+expression+in+human+bone+marrow-derived+stromal+cells.">Lentiviral vectors for sustained transgene expression in human bone marrow-derived stromal cells.</a> Mol. Ther. 5, 555-565 (2002).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morph. 88 (1), 44-92 (1951).</li><li>Glover, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+and+anterograde+axonal+tracing+with+fluorescent+dextrans+in+the+embryonic+nervous+system.">Retrograde and anterograde axonal tracing with fluorescent dextrans in the embryonic nervous system.</a> Neuroscience Protocols. 30, 1-13 (1995).</li><li>O'Donovan, M. J., Bonnot, A., Mentis, G. Z., Arai, Y., Chub, N., Shneider, N. A., Wenner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+spatiotemporal+organization+of+neural+activity+in+the+developing+spinal.">Imaging the spatiotemporal organization of neural activity in the developing spinal.</a> Dev. Neurobiol. 68, 788-803 (2008).</li><li>Mendelson, B., Frank, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+monosynaptic+sensory-motor+connections+form+in+the+absence+of+patterned+neural+activity+and+motoneuronal+cell+death.">Specific monosynaptic sensory-motor connections form in the absence of patterned neural activity and motoneuronal cell death.</a> J. Neurosci. 11, 1390-1403 (1991).</li><li>Glover, J. C., Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chimeric+Animal+Models+in+Human+Stem+Cell+Biology.">Chimeric Animal Models in Human Stem Cell Biology.</a> ILAR Journal. 51, 62-73 (2009).</li><li>Lee, G., Kim, H., Elkabetz, Y., Al Shamy, G., Panagiotakos, G., Barberi, T., Tabar, V., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+directed+differentiation+of+neural+crest+stem+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells.">Isolation and directed differentiation of neural crest stem cells derived from human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 25, 1468-1475 (2007).</li><li>Jiang, X., Gwye, Y., McKeown, S. J., Bronner-Fraser, M., Lutzko, C., Lawlor, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+neural+crest+cells+derived+from+in+vitro+differentiated+human+embryonic+stem+cells.">Isolation and characterization of neural crest cells derived from in vitro differentiated human embryonic stem cells.</a> Stem Cells Dev. 18, 1059-1070 (2008).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

עובר התרנגולת הוא מודל חיה נוח ומגוון ניסויים xenotransplantation. העדר מערכת חיסונית תפקודית במהלך ההתפתחות העוברית ואת העובר מאפשר הישרדות התפתחותם של תאים ממינים כל כך סובל את טמפרטורת הדגירה. עוברי עוף שימשו כדי לבדוק את פוטנציאל ההתחדשות של סוגים שונים של בתאי גזע (הנסקרת נ&quot;צ. 15). בתאי גזע היונקים יכולים להשתלב ברקמות העובר עוף כולל מערכת העצבים המרכזית, שם הם יכולים להצמיח נוירונים אשר התחזיות axonal, קישוריות הסינפטי ומאפיינים אלקטרו ניתן להעריך בהקשר של 1,2 מעגלים עצביים פונקציונלי. מכיוון ניתוחים קלים יחסית, מבוצעים תחת זריקות חזותי במקום לשלוט stereotaxic, מספר העוברים יכול בקלות להיות מוגברת כדי להכיל תנאים ניסויים שונים בתוך ניסוי יחיד. בדרך כלל התאים יהיה ניתן להזריק לתוך 20-30 עוברים בתוך הניסוי 4 שעות. תמותה לאחר הזרקה של עוברים הוא הגורם המגביל העיקרי. אמצעי זהירות יש לנקוט כדי למנוע דימום והתייבשות. שימו לב כי ישנם מסוימים בשלבי התפתחות קריטית שבה שיעור התמותה עולה טבעי. להשלים את העובר עם מ&quot;ל כמה הזרקה חם, עיקור עוף הצלצול הבא יום לפני שלבי התפתחות קריטיים, כמו גם להבטיח את החלון הביצה היטב אטום מכוונת כדי למנוע דליפה, משפר הישרדות. אם יש דליפה דרך אטם את הקלטת אמורה להתרחש, להסיר את הסרט, לייבש את המשטחים מחדש הקלטת. חוקרים אחדים להשתמש שעווה זכוכית או פלסטיק coverslips לאטום את החלון. התמותה לא צריך להיות שונה באופן משמעותי לעומת הזריק דמה המופעלים עוברים. למרות שאנו מתמקדים כאן על זריקה של בתאי גזע אנושיים לתוך anlage של המוח וחוט השדרה, בתאי גזע יכול גם להיות מוזרק anlage של איברים אחרים (ראו נ&quot;צ למשל. 4). כל איבר מציבה אתגרים משלה. לדוגמה, הזרקה לתוך הלב יכול להיות מאתגר בגלל התנגדות מכנית גבוהה פיפטה חדירה ובגלל התנועות, אשר מצד שני יכול להיות האטה על ידי קירור עוברים לטמפרטורת החדר לפני ההזרקה. איברים כי חוסר לומן לא יכול להכיל את הזרקת כמויות מספיקות ולכן עשויים לחייב פגיעה כירורגית כדי ליצור כלי קיבול. מניסיוננו, לאחר הנגע התחדשות רקמות יתרון משום שהוא מקדם את שילובם של בתאי גזע אנושיים לתוך הרקמה. תאים יכולים גם להיות מוזרק mesenchyme עובריים כגון mesenchyme somitic פיזור או הרכס העצבי נודדים כדרך להשיג הכללתו נגזרים mesenchymal, כולל הגרעינים לפסגה הנגזרות עצביים היקפיים 16,17.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fluorescent microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Olympus IX-81</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereo Investigator</td>
<td>Program</td>
<td>MicroBrightField</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MIP-GFP mice</td>
<td>Mice</td>
<td>Jackson Laboratory</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mathematica</td>
<td>Program</td>
<td>Wolfram</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Image J</td>
<td>Program</td>
<td>NIH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slidebook</td>
<td>Program</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo

עובר התרנגולת הוא מודל חיה קלאסית לחקר ההתפתחות העוברית של העובר תקין לניסויים xenotransplantation ללמוד את התנהגותם של תאים סטנדרטית<em&gt; In vivo</em&gt; איכות הסביבה. היתרונות העיקריים של העובר עוף כוללים עלות נמוכה, נגישות גבוהה, קלות מניפולציה כירורגית היעדר מערכת חיסונית מפותחת. Xenotransplantation לעוברי עוף יכול לספק מידע רב ערך על התפשטות תאים, התמיינות התנהגות, התגובות של התאים אותות מוגדר נישות רקמה עוברית, ואת הפוטנציאל tumorigenic. השתלת התאים לעוברי עוף יכול להיות גם צעד לקראת ניסויים השתלת במודלים של בעלי חיים אחרים. לאחרונה העובר עוף נעשה שימוש כדי להעריך את הפוטנציאל neurogenic של גזע האדם ובתאים בעקבות ההשתלה לתוך anlage עצביים<sup&gt; 1-6</sup&gt;. בסרטון הזה אנחנו המסמך ההליך כולו להשתלה בתאי גזע אנושיים למערכת העצבים המרכזית בפיתוח של העובר עוף. ההליך מתחיל עם הדגירה של ביציות מופרות עד עוברים בגיל הרצוי פיתחו. קליפת נפתח אז, בניגוד העובר על ידי הזרקת צבע בין העובר לבין החלמון. נגעים קטנים עשויים בצינור העצבי באמצעות microsurgery, יצירת אתר משובי להפקדה תא המקדמת אינטגרציה הבאים לרקמת המארח. אנו מדגימים זריקות בתאי גזע אנושיים לתוך נגעים כאלה שנעשו בחלק של הצינור העצבי המהווה למוח האחורי ואת חוט השדרה, אל לומן החלק של הצינור העצבי שיוצר המוח. זריקות מערכתית לתוך הוורידים והעורקים extraembryonic הם הפגינו גם כדרך חלופית, כדי לספק תאים לרקמות vascularized כולל מערכת העצבים המרכזית. לבסוף אנו מראים כיצד להסיר את העובר מן הביצה לאחר כמה ימים של התפתחות נוספת ואיך לנתח את חוט השדרה חינם עבור ניתוחים פיזיולוגיים, היסטולוגית או ביוכימי הבאים.

Watch this Scientific Journal Video about Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo at JoVE.com

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

במאמר זה אנו מציגים שיטה השתלת בתאי גזע האדם לאזורים שונים של מערכת העצבים המרכזית של העובר עוף. זה מספק<em&gt; In vivo</em&gt; מודל להערכת התפשטות והבחנה של סוגים שונים של בתאי גזע אנושיים בסביבות הרקמה העוברית.

Xenotransplantation בתאי גזע אנושיים לתוך העובר עוף

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

Transfecting אדם בתאי גזע עצביים עם Nucleofector Amaxa

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Counting Human Neural Stem Cells

ספירת אדם בתאי גזע עצביים

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

Passaging אדם בתאי גזע עצביים

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Immunocytochemistry: אדם בתאי גזע עצביים

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

ב Electroporations אובו של HH 10 עוברים שלב עוף

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

התמיינות של תאים עובריים לתוך מבשרי Oligodendrocyte

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral בתיווך מציאה במהלך Ex Vivo Erythropoiesis של אדם בתאי גזע hematopoietic

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

תכנות מחדש האדם תאים סומטיים תוך המושרה בתאי גזע pluripotent (iPSCs) באמצעות וקטור retroviral עם GFP

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

התמיינות של תאי העור של עכבר יילוד נגזר גזע לתאים דמוי נבט<em&gt; במבחנה</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...