Name: in situ protocol for butterfly pupal wings using riboprobes
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes at JoVE.com

Мы благодарим Джейн Selegue, Маргарет Холлингсворт, Джин Берри, Ryo Futahashi, Najmus Sahar Mahfooz, Александр Popadic, Боб Рид, Рош технической поддержки за помощью в устранении этого протокола. Мы также благодарим Уильям Piel за консультацией по редактированию фильма.

ДЕНЬ 1 <ol><li> Подготовьте следующие решения: <ul><li> 10x PBS </li><li> 1x PBS </li><li> 1x PBT </li><li> DDH 2 O <ul><li> Добавить DEPC на 0,1% общего объема и встряхните решения энергично. </li><li> Автоклав. </li></ul></li><li> 4% Параформальдегид Fix - с помощью PBS-DEPC </li><li> Протеиназы К решению - если осадок присутствует, вихревые эне...

<ol>
	<li>Carroll, S. B., Gates, J., Keys, D. N., Paddock, S. W., Panganiban, G. E. F., Selegue, J. E., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+and+eyespot+determination+in+butterfly+wings.">Pattern formation and eyespot determination in butterfly wings.</a> Science. 265, 109-114 (1994).</li><li>Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+in+formamide+protects+RNA+from+degradation.">Solubilization in formamide protects RNA from degradation.</a> Nucleic Acids Research. 20, 3791-3792 (1992).</li><li>Keys, D. N., Lewis, D. L., Selegue, J. E., Pearson, B. J., Goodrich, L. V., Johnson, R. J., Gates, J., Scott, M. P., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+a+hedgehog+regulatory+circuit+in+butterfly+eyespot+evolution.">Recruitment of a hedgehog regulatory circuit in butterfly eyespot evolution.</a> Science. 283, 532-534 (1999).</li><li>Marcus, J. M., Ramos, D. M., Monteiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+transformation+of+the+butterfly+Bicyclus+anynana.">Germ line transformation of the butterfly Bicyclus anynana.</a> Proc R Soc Lond B (Suppl). 271, S263-S265 (2004).</li><li>Monteiro, A., Glaser, G., Stockslagger, S., Glansdorp, N., Ramos, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+insights+into+questions+of+lepidopteran+wing+pattern+homology.">Comparative insights into questions of lepidopteran wing pattern homology.</a> BMC Developmental Biology. 6, 52 (2006).</li><li>Ramos, D. M., Kamal, F., Wimmer, E. A., Cartwright, A. N., Monteiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+spatial+control+of+transgene+expresson+using+laser+induction+of+the+hsp70+promoter.">Temporal and spatial control of transgene expresson using laser induction of the hsp70 promoter.</a> BMC Developmental Biology. 6, 55 (2006).</li><li>Weatherbee, S. D., Nijhout, H. F., Grunert, L. W., Halder, G., Galant, R., Selegue, J., Carroll, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrabithorax+function+in+butterfly+wings+and+the+evolution+of+insect+wing+patterns.">Ultrabithorax function in butterfly wings and the evolution of insect wing patterns.</a> 9, 109-115 (1999).</li></ol>

Оптимизация существующих протоколов В месте гибридизации на личиночной диски крыла были успешно выполнены, используя диски с Precis бабочек coenia (Carroll и др., 1994;. Ключи и др., 1999;. Уэтерби и др., 1999.). Текущий протокол был адаптирован с подробного письменного протокола по запросу из Кэрролла Лаборатор?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fix Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>4% Paraformaldehyde in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>PBT</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>0.1% Tween 20 in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Proteinase K solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2.5&#xF06D;g/ml Proteinase K in PBT</td>
</tr>
<tr>
<td>Digestion Stop Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2 mg/ml glycine in PBT</td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Hybridization Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For 50 ml PHB: 12 ml DEPC treated water + 25 ml Formamide + 12.5 ml 20 x SSC + 50 ul Tween 20 + 500 ul 10 mg/ml salmon sperm (Rnase free, heat denatured prior to addition to solution).
</td>
</tr>
<tr>
<td>Hybridization Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Add 1 mg/ml glycogen to prehybridization buffer</td>
</tr>
<tr>
<td>Block Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>50 mM Tris pH 6.8, 150 mM NaCl, 0.5% IGEPAL (NP40), 5 mg/ml BSA
</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-DIG</td>
<td>Ab</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 093 274 910</td>
<td>Alkaline Phosphatase conjugated</td>
</tr>
<tr>
<td>DIG Wash and Block Buffer Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 585 762 001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Crystal Mount Aqueous Mounting Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C0612</td>
<td>Mounting Medium </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

in situ protocol for butterfly pupal wings using riboprobes

Здесь мы представляем, в видео-формат, протокол на месте гибридизации в куколки крылья бабочки Bicyclus anynana использованием riboprobes. В месте гибридизации, основой биологии развития, являются полезными для изучения пространственных и временных паттернов экспрессии генов в развивающихся тканей на уровне транскрипции. Если антитела, направленные белковые продукты транскрипции генов до сих пор не разработаны, и / или Есть несколько копий гена белка в частности генома, которые не могут быть дифференцированы с использованием имеющихся антител, в места нахождения имущества может быть использован вместо. Хотя на месте техника для личинок диски крыла стала доступна для бабочки сообщества в течение нескольких лет, текущий протокол был оптимизирован для более крупных и более хрупкими куколки крылья.

Watch this Scientific Journal Video about In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes at JoVE.com

In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes

С целью изучения экспрессии генов в ткани куколки крыло Bicyclus anynana, мы представляем оптимизированный протокол на месте гибридизации использованием riboprobes. Мы также предоставляем рекомендации по дальнейшей оптимизации этого протокола для использования в куколки крылья других видов чешуекрылых.

В месте Протокол крылья бабочки куколки Использование Riboprobes

Here we present, in video format, a protocol for in situ hybridizations in pupal wings of the butterfly Bicyclus anynana using riboprobes.  In situ ...

Research

JoVE Journal

Biology

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Нерадиоактивные На месте Гибридизация Протокола, применяемыми для Норвегии ель и диапазон видов растений

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Флуоресценция На месте Гибридизации (FISH) протокола в человеческой сперме

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

Дрозофилы куколки Живот Immunohistochemistry

The Drosophila pupal abdomen is an established model system for the study of epithelial morphogenesis and the development of sexually dimorphic ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Визуализации и анализа молекул мРНК с помощью флуоресцентной<em&gt; В Ситу</em&gt; Гибридизация в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

Быстрый Люминесцентная<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация Протокола о Xist РНК в сочетании с Иммунофлуоресценции модификации гистонов в X-хромосоме инактивации

Combining RNA fluorescent in situ hybridization (FISH) with immunofluorescence (immuno-FISH) creates a technique that can be employed at the single cell ...

Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs

Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs

Вскрытие и Монтаж<em&gt; Drosophila</em&gt; Куколочные глаз Диски

The Drosophila melanogaster eye disc is a powerful system that can be used to study many different biological processes.  It contains approximately 800 ...

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Методы для промежуточной куколки периодов и измерение крыла пигментации Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

Протокол для лабораторных жилья из бирюзы Пецилиевые рыбы (Nothobranchius furzeri)

The development of husbandry practices in non-model laboratory fish used for experimental purposes has greatly benefited from the establishment of ...

At-Risk Butterfly Captive Propagation Programs to Enhance Life History Knowledge and Effective Ex Situ Conservation Techniques

На риск бабочка плен программы распространения для повышения знаний истории жизни и эффективных Ex Situ Методы сохранения

Improving knowledge of ex situ best practices for at-risk butterflies is important for generating successful conservation and recovery program outcomes. ...

Probing mRNA Kinetics in Space and Time in Escherichia coli using Two-Color Single-Molecule Fluorescence In Situ Hybridization

Probing mRNA Kinetics in Space and Time in Escherichia coli using Two-Color Single-Molecule Fluorescence In Situ Hybridization

Зондирование мРНК Кинетика в пространстве и времени в Escherichia coli с помощью двухцветной одноямекулярной флуоресценции в гибридизации Situ

Single-molecule fluorescence in situ hybridization (smFISH) allows for counting the absolute number of mRNAs in individual cells. Here, we describe an ...