Name: isolation, enrichment, and maintenance of medulloblastoma stem cells
Uploaded: 2010-09-01T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells at JoVE.com

وأيد هذه الدراسة من المنح المقدمة من فاندربيلت ، انجرام السرطان غرانت مركز الدعم (P30 CA068485) ، واستئصال ورم من الدماغ مؤسسة الطفولة والمعاهد الوطنية للصحة (NS042205).

1. الجزئي تشريح الورم الحاملة المخيخ ، تفكك نسيج الورم والتصفيحات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استرجاعها من الأنسجة الورم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض موه الرأس وأعراض عصبية نموذجية ، بما في ذلك الشلل الخلفي والفشل في استع...

<ol>
	<li>Rossi, A., Caracciolo, V., Russo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medulloblastoma:+From+Molecular+Pathology+to+Therapy.">Medulloblastoma: From Molecular Pathology to Therapy.</a> Clin Cancer Res. 14 (4), 971-971 (2008).</li><li>Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Neuronal+Precursor+Proliferation+in+the+Cerebellum+by+Sonic+Hedgehog.">Control of Neuronal Precursor Proliferation in the Cerebellum by Sonic Hedgehog.</a> P. Neuron. 22 (1), 103-103 (1999).</li><li>Dahmane, N., Ruiz, A., Altaba, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+regulates+the+growth+and+patterning+of+the+cerebellum.">Sonic hedgehog regulates the growth and patterning of the cerebellum.</a> Development. 126 (14), 3089-3089 (1999).</li><li>Wallace, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purkinje-cell-derived+Sonic+hedgehog+regulates+granule+neuron+precursor+cell+proliferation+in+the+developing+mouse+cerebellum.">Purkinje-cell-derived Sonic hedgehog regulates granule neuron precursor cell proliferation in the developing mouse cerebellum.</a> Curr Biol. 9 (8), 445-445 (1999).</li><li>Fan, X., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medullablastoma+Stem+Cells.">Medullablastoma Stem Cells.</a> J Clin Oncol. 26 (17), 2821-2821 (2008).</li><li>Yoon, J. W., Gilbertson, R., Iannaccone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+a+Role+for+Hedgehog+Pathway+Activation+in+Desmoplastic+Medulloblastoma+by+Identifying+GLI1+Target+Genes.+International+journal+of+cancer.">Defining a Role for Hedgehog Pathway Activation in Desmoplastic Medulloblastoma by Identifying GLI1 Target Genes. International journal of cancer.</a> 124 (1), 109-109 (2009).</li><li>O'Dorisio, M. S., Khanna, G., Bushnell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+anatomic+and+molecularly+targeted+imaging+in+the+diagnosis+and+surveillance+of+embryonal+tumors+of+the+nervous+and+endocrine+systems+in+children.+Review.">Combining anatomic and molecularly targeted imaging in the diagnosis and surveillance of embryonal tumors of the nervous and endocrine systems in children. Review.</a> Cancer metastasis reviews. 27 (4), 665-665 (2008).</li><li>Corcoran, R. B., Bachar Raveh, T., Barakat, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+2+Is+Required+for+Progression+to+Advanced+Medulloblastoma+in+patched1+Heterozygous+Mice.">Insulin-like Growth Factor 2 Is Required for Progression to Advanced Medulloblastoma in patched1 Heterozygous Mice.</a> Cancer research. 68 (21), 8788-8788 (2008).</li><li>Gilbertson, R. J., Ellison, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Origins+of+Medulloblastoma+Subtypes.">The Origins of Medulloblastoma Subtypes.</a> Annual review of pathology. 3, 341-341 (2008).</li><li>Ward, R. J., Lee, L., Graham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+CD15++Cancer+Stem+Cells+in+Patched-1+Deficient+Mouse+Medulloblastoma.">Multipotent CD15+ Cancer Stem Cells in Patched-1 Deficient Mouse Medulloblastoma.</a> Cancer research. 69 (11), 4682-4682 (2009).</li><li>Mao, J., Ligon, K. L., Rakhlin, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Somatic+Mouse+Model+to+Survey+Tumorigenic+Potential+Applied+to+the+Hedgehog+Pathway.">A Novel Somatic Mouse Model to Survey Tumorigenic Potential Applied to the Hedgehog Pathway.</a> Cancer research. 66, 10171-10171 (2006).</li><li>Han, Y. G., Kim, H. J., Dlugosz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+and+opposing+roles+of+primary+cilia+in+medulloblastoma+development.">Dual and opposing roles of primary cilia in medulloblastoma development.</a> Nature medicine. 15 (9), 1062-1062 (2009).</li></ol>

نحن تصف وسيلة فعالة لعزل ، وإثراء والحفاظ على الخلايا الجذعية من أنسجة الورم نخاعي الأولية التي تم استردادها من الفئران الطافرة مع إشارات نشطة constitutively القنفذ. وجدنا أن واحدة خطوة حاسمة في وضع بنجاح الجذعية السرطانية صحية خط الخلية هو العلاج Accutase المستخدمة أثناء تفك?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Neurobasal medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21103049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hEGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>PHG0311</td>
<td>25ng/ml</td>
</tr>
<tr>
<td>bFGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>PHG0023</td>
<td>25ng/ml</td>
</tr>
<tr>
<td>N2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17502048</td>
<td>1X</td>
</tr>
<tr>
<td>B27(-RA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>12587010</td>
<td>1X</td>
</tr>
<tr>
<td>Accutase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A1110501</td>
<td>50%</td>
</tr>
<tr>
<td>Gelatin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1393</td>
<td> 0.1%</td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25030081</td>
<td>2mM</td>
</tr>
<tr>
<td>Primaria dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>087724C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sox2 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MAB4343</td>
<td>Mouse, 1:1000</td>
</tr>
<tr>
<td>Nestin antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DSHB</td>
<td>rat401</td>
<td>Mouse, 1:200</td>
</tr>
<tr>
<td>YFP antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>A11122</td>
<td>Rabbit, 1:2000</td>
</tr>
<tr>
<td>GFAP antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Neuromics</td>
<td>CH22102</td>
<td>Chicken, 1:1000</td>
</tr>
<tr>
<td>Tuj1 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T5076</td>
<td>Mouse, 1:2000</td>
</tr>
<tr>
<td>NeuN antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MAB377</td>
<td>Mouse, 1:2000</td>
</tr>
<tr>
<td>CNPase antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MAB326</td>
<td>Mouse, 1:1000</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation, enrichment, and maintenance of medulloblastoma stem cells

وقد اقترحت أورام المخ لامتلاك عدد قليل من السكان من الخلايا الجذعية التي هي السبب الجذري لتكون الأورام. وقد تم اعتماد المقايسات Neurosphere عموما لدراسة طبيعة الخلايا الجذعية العصبية ، بما في ذلك تلك المستمدة من الأنسجة الطبيعية ورمي. ومع ذلك ، وكميات ملموسة من التمايز وموت الخلية شائعة في neurospheres مثقف بسبب المرجح أن حالة شبه مثالية مثل إمكانية الوصول إلى جميع الخلايا ضمن المجاميع المجال لثقافة المتوسط. يتميز نخاعي ، وأكثرها شيوعا ورم CNS الأطفال ، عن طريق التقدم السريع والميل الى الانتشار على طول محور الدماغ الشوكي كامل مع نتائج سريرية كئيبة. هو ورم نخاعي ظهاري من المخيخ ، وهو ما يمثل 20 ٪ و 40 ٪ من الورم داخل القحف والحفرة الخلفية في مرحلة الطفولة ، على التوالي 1. الآن أنها راسخة بأن SHH يحفز يشير انتشار الخلايا العصبية للدماغ السلائف الحبيبية (CGNPs) خلال التنمية مخيخي 2-4. وربطت دراسات عديدة باستخدام نماذج الماوس ، والذي يتم تنشيط المسار constitutively SHH ، مما يشير SHH مع نخاعي 5-9. وأظهر تقرير صدر مؤخرا أن مجموعة فرعية من الخلايا المشتقة من الفئران نخاعي LacZ Patched1 / + هي الخلايا الجذعية السرطانية ، والتي هي قادرة على بدء والأورام propogating 10. نحن هنا وصف وسيلة فعالة لعزل ، وإثراء والحفاظ على الخلايا الجذعية المشتقة من ورم نماذج الماوس العديد من نخاعي ، مع تنشيط مسار SHH constitutively بسبب طفرة في مملس (11 ، على النحو المشار إليه hereon SmoM2) ، وهو النوع من الاختزال الذي هو أمر حاسم لSHH مسار التنشيط. في كل الأنسجة نخاعي معزولة ، كنا قادرين على إقامة العديد من المستعمرات التكاثري للغاية. يمكن لهذه الخلايا وأعرب بقوة عدة الخلايا الجذعية العصبية علامات مثل Nestin وSox2 ، مقاطع المسلسل الخضوع (أكبر من 20) وكان مولد الرمع. في حين أن هذه الخلايا الجذعية السرطانية مثقف كانت صغيرة نسبيا ، وغالبا ما bipoar النووية مع ارتفاع لنسبة حشوية عند المثقف في ظل ظروف لصالح وقف نمو الخلايا ، التي غيرت بشكل كبير على التشكل ، وسعت العمليات الخلوية متعددة ، بالارض ، وانسحب من دورة الخلية عند التحول إلى خلية مستنبت تستكمل مع مصل بقري جنيني من 10 ٪. الأهم من ذلك ، هذه الخلايا الجذعية السرطانية المختلفة في Tuj1 + أو + NeuN الخلايا العصبية ، والخلايا النجمية GFAP + + CNPase oligodendrocytes ، وبالتالي تسليط الضوء على قوة متعددة. وعلاوة على ذلك ، كانت هذه الخلايا قادرة على التكاثر medulloblastomas الثانوية عند زرعها في الفئران orthotopically المضيف.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells at JoVE.com

Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells

يصف هذا البروتوكول من العزلة ، والإثراء ، وصيانة الخلايا الجذعية ورم نخاعي المستمدة من الفئران الطافرة مع سونيك القنفذ مسار النشاط خارج الرحم.

العزلة ، والإثراء ، وصيانة الخلايا الجذعية نخاعي

Brain tumors have been suggested to possess a small population of stem cells that are the root cause of tumorigenesis. Neurosphere assays have been ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intracranial Orthotopic Allografting of Medulloblastoma Cells in Immunocompromised Mice

مثلي Allografting داخل الجمجمة من خلايا المناعة لدى الفئران نخاعي

Medulloblastoma is the most common pediatric tumor of the nervous system. A large body of animal studies has focused on cerebellar granule neuron ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

العزل والتوسع في الخلايا الجذعية العصبية الكبار باستخدام الفحص Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

تعيش خلية التصوير الحسي للخلايا السليمة في الجهاز السلائف ذبابة الفاكهة شرانق

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

العزلة وثقافة العصبية الخلايا الجذعية من بصيلات الشعر كريست الإنسان

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

الفحص Neuroblast: والفحص للانشاء وإثراء خلايا متعلق بالخلايا العصبية السلف من التفريق العصبية الجذعية آله الخلية باستخدام التدفق الخلوي

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

العزلة والثقافة وطويل الأجل صيانة الابتدائية الدماغ المتوسط ​​الدوبامين العصبية من المخ الجنينية القوارض

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

تحديد علامات سطح الخلية من الجذعية العصبية الأولية والخلايا السلف عن طريق وضع العلامات الأيضية من Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...