Name: isolation, enrichment, and maintenance of medulloblastoma stem cells
Uploaded: 2010-09-01T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי תרומות של ונדרבילט Ingram-Cancer Center תמיכה גרנט (P30 CA068485), המוח ילדות קרן גידול לבין המכון הלאומי לבריאות (NS042205).

1. Micro-דיסקציה של המוח הקטן נושאות גידולים, דיסוציאציה של רקמות ציפוי הגידול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איחזור של רקמת הגידול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדולובלסטומה עכברים חולים נושאת לעתים קרובות היו המנוון, מוצג hydrocephaly ?...

<ol>
	<li>Rossi, A., Caracciolo, V., Russo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medulloblastoma:+From+Molecular+Pathology+to+Therapy.">Medulloblastoma: From Molecular Pathology to Therapy.</a> Clin Cancer Res. 14 (4), 971-971 (2008).</li><li>Wechsler-Reya, R. J., Scott, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Neuronal+Precursor+Proliferation+in+the+Cerebellum+by+Sonic+Hedgehog.">Control of Neuronal Precursor Proliferation in the Cerebellum by Sonic Hedgehog.</a> P. Neuron. 22 (1), 103-103 (1999).</li><li>Dahmane, N., Ruiz, A., Altaba, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sonic+hedgehog+regulates+the+growth+and+patterning+of+the+cerebellum.">Sonic hedgehog regulates the growth and patterning of the cerebellum.</a> Development. 126 (14), 3089-3089 (1999).</li><li>Wallace, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purkinje-cell-derived+Sonic+hedgehog+regulates+granule+neuron+precursor+cell+proliferation+in+the+developing+mouse+cerebellum.">Purkinje-cell-derived Sonic hedgehog regulates granule neuron precursor cell proliferation in the developing mouse cerebellum.</a> Curr Biol. 9 (8), 445-445 (1999).</li><li>Fan, X., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medullablastoma+Stem+Cells.">Medullablastoma Stem Cells.</a> J Clin Oncol. 26 (17), 2821-2821 (2008).</li><li>Yoon, J. W., Gilbertson, R., Iannaccone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+a+Role+for+Hedgehog+Pathway+Activation+in+Desmoplastic+Medulloblastoma+by+Identifying+GLI1+Target+Genes.+International+journal+of+cancer.">Defining a Role for Hedgehog Pathway Activation in Desmoplastic Medulloblastoma by Identifying GLI1 Target Genes. International journal of cancer.</a> 124 (1), 109-109 (2009).</li><li>O'Dorisio, M. S., Khanna, G., Bushnell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+anatomic+and+molecularly+targeted+imaging+in+the+diagnosis+and+surveillance+of+embryonal+tumors+of+the+nervous+and+endocrine+systems+in+children.+Review.">Combining anatomic and molecularly targeted imaging in the diagnosis and surveillance of embryonal tumors of the nervous and endocrine systems in children. Review.</a> Cancer metastasis reviews. 27 (4), 665-665 (2008).</li><li>Corcoran, R. B., Bachar Raveh, T., Barakat, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+2+Is+Required+for+Progression+to+Advanced+Medulloblastoma+in+patched1+Heterozygous+Mice.">Insulin-like Growth Factor 2 Is Required for Progression to Advanced Medulloblastoma in patched1 Heterozygous Mice.</a> Cancer research. 68 (21), 8788-8788 (2008).</li><li>Gilbertson, R. J., Ellison, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Origins+of+Medulloblastoma+Subtypes.">The Origins of Medulloblastoma Subtypes.</a> Annual review of pathology. 3, 341-341 (2008).</li><li>Ward, R. J., Lee, L., Graham, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+CD15++Cancer+Stem+Cells+in+Patched-1+Deficient+Mouse+Medulloblastoma.">Multipotent CD15+ Cancer Stem Cells in Patched-1 Deficient Mouse Medulloblastoma.</a> Cancer research. 69 (11), 4682-4682 (2009).</li><li>Mao, J., Ligon, K. L., Rakhlin, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Somatic+Mouse+Model+to+Survey+Tumorigenic+Potential+Applied+to+the+Hedgehog+Pathway.">A Novel Somatic Mouse Model to Survey Tumorigenic Potential Applied to the Hedgehog Pathway.</a> Cancer research. 66, 10171-10171 (2006).</li><li>Han, Y. G., Kim, H. J., Dlugosz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+and+opposing+roles+of+primary+cilia+in+medulloblastoma+development.">Dual and opposing roles of primary cilia in medulloblastoma development.</a> Nature medicine. 15 (9), 1062-1062 (2009).</li></ol>

אנו מתארים דרך יעילה לבודד, להעשיר ולתחזק גזע מדולובלסטומה תאים מרקמת הגידול הראשוני שנמצאו בעכברים עם מוטציה פעיל constitutively הקיפוד איתות. מצאנו כי צעד קריטי בהצלחה בהקמת גידול בריא קו תא גזע הוא הטיפול Accutase שימוש במהלך דיסוציאציה של רקמת הגידול הראשוני. מניסיוננו, כא...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Neurobasal medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21103049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hEGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>PHG0311</td>
<td>25ng/ml</td>
</tr>
<tr>
<td>bFGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>PHG0023</td>
<td>25ng/ml</td>
</tr>
<tr>
<td>N2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17502048</td>
<td>1X</td>
</tr>
<tr>
<td>B27(-RA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>12587010</td>
<td>1X</td>
</tr>
<tr>
<td>Accutase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A1110501</td>
<td>50%</td>
</tr>
<tr>
<td>Gelatin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1393</td>
<td> 0.1%</td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25030081</td>
<td>2mM</td>
</tr>
<tr>
<td>Primaria dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>087724C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sox2 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MAB4343</td>
<td>Mouse, 1:1000</td>
</tr>
<tr>
<td>Nestin antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DSHB</td>
<td>rat401</td>
<td>Mouse, 1:200</td>
</tr>
<tr>
<td>YFP antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Probes</td>
<td>A11122</td>
<td>Rabbit, 1:2000</td>
</tr>
<tr>
<td>GFAP antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Neuromics</td>
<td>CH22102</td>
<td>Chicken, 1:1000</td>
</tr>
<tr>
<td>Tuj1 antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>T5076</td>
<td>Mouse, 1:2000</td>
</tr>
<tr>
<td>NeuN antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MAB377</td>
<td>Mouse, 1:2000</td>
</tr>
<tr>
<td>CNPase antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>MAB326</td>
<td>Mouse, 1:1000</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation, enrichment, and maintenance of medulloblastoma stem cells

גידולים במוח הוצעו להחזיק אוכלוסייה קטנה של תאי גזע הם שורש tumorigenesis. מבחני Neurosphere אומצו בדרך כלל ללמוד את טבעו של בתאי גזע עצביים, כולל אלו שמקורם ברקמות נורמליות tumorous. עם זאת, כמות ניכרת של התמיינות ומוות התא נפוצים neurospheres תרבותי בשל סביר מצב תת אופטימלי כגון נגישות של כל התאים בתוך אגרגטים בתחום התרבות עד בינוני. מדולובלסטומה, הנפוצים ביותר בגידול ילדים CNS, מאופיינת בהתקדמות המהירה שלה נטייה להתפשט לאורך הציר מוח השדרה שלם עם התוצאה הקלינית העגומה. מדולובלסטומה היא גידול neuroepithelial של המוח הקטן, והיוו 20% ו -40% של גידול תוך גולגולתי ו הפוסות האחורי בילדות, בהתאמה 1. עכשיו זה מבוססת היטב כי ששש איתות מעודד ריבוי cerebellar נוירון מבשרי גרגיר (CGNPs) במהלך הפיתוח cerebellar 2-4. מחקרים רבים באמצעות מודלים העכבר, שבו מסלול ששש מופעל constitutively, מצאו קשר איתות ששש עם מדולובלסטומה 5-9. דו&quot;ח האחרונות הראו כי תת קבוצה של תאים שמקורם מדולובלסטומה Patched1 עכברים LacZ / + הם גזע סרטניים בתאים, אשר מסוגלים ליזום propogating גידולים 10. כאן אנו מתארים שיטה יעילה לבודד, להעשיר ולתחזק בתאי גזע סרטניים שמקורם מודלים העכבר כמה מדולובלסטומה, עם מסלול ששש מופעל constitutively עקב מוטציה והחליק (11, hereon כאמור SmoM2), GPCR כי הוא קריטי עבור ששש מסלול ההפעלה. ברקמת כל מדולובלסטומה מבודדים, הצלחנו להקים מושבות שגשוג רבים מאוד. תאים אלה הביעו וחסונה בתאי גזע עצביים מספר סמנים כגון Nestin ו Sox2, יכול לעבור קטעים סדרתי (יותר מ 20) והיו clonogenic. בעוד גזע אלה תאים בתרבית הגידול היו קטנות יחסית, bipoar לעתים קרובות עם גרעיני גבוהה יחס cytoplasmic כאשר בתרבית בתנאים לטובת צמיחה תא גזע, הם שינו באופן דרמטי את המורפולוגיה שלהם, הוארך תהליכים תאיים רבים, שטוח ונסוג מן מחזור התא על מעבר לתא בינוני תרבות בתוספת סרום 10% שור העובר. וחשוב יותר, אלה בתאי גזע סרטניים הבדיל לתוך Tuj1 + + או NeuN נוירונים, האסטרוציטים GFAP + + ו oligodendrocytes CNPase, ובכך הדגשת עוצמה מרובה שלהם. יתר על כן, תאים אלה מסוגלים הפצת medulloblastomas משני כאשר מושתלים orthotopically לעכברים המארח.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells at JoVE.com

Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד, העשרה, ותחזוקה של הגידול מדולובלסטומה בתאי גזע שמקורם בעכברים מוטנטים עם פעילות חוץ רחמי מסלול סוניק הקיפוד.

, בידוד והעשרה, ותחזוקה של גזע תאים מדולובלסטומה

Brain tumors have been suggested to possess a small population of stem cells that are the root cause of tumorigenesis. Neurosphere assays have been ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intracranial Orthotopic Allografting of Medulloblastoma Cells in Immunocompromised Mice

Allografting orthotopic תוך גולגולתי של תאים מדולובלסטומה ב עכברים immunocompromised

Medulloblastoma is the most common pediatric tumor of the nervous system. A large body of animal studies has focused on cerebellar granule neuron ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

בידוד הרחבה של תאים בוגרים עכבר גזע עצביים שימוש Assay Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Assay Neuroblast: Assay לדור והעשרה של ובתאים העצבית הבחנה בין צאצאיהם גזע עצביים Cell שימוש cytometry זרימה

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

בידוד והתרבות של תאי גזע בוגרים עצביים מאזור העכבר Subcallosal

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Isolation and Culture of Embryonic Mouse Neural Stem Cells

בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים עובריים בעכבר

Neural stem cells (NSCs) are multipotent and can give rise to the three major cell types of the central nervous system (CNS). In vitro culture and ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

זיהוי סמני שטח תא של גזע עצבי ראשוני ובתאי מחולל מטבולית על ידי תיוג מטבולי של סילוגליקן

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...