Name: toxoplasma gondii cyst wall formation in activated bone marrow-derived macrophages and bradyzoite conditions
Uploaded: 2010-08-12T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions at JoVE.com

इस काम विस्कॉन्सिन - मैडिसन हरमन मैं शापिरो गणमान्य ग्रेजुएट (CMT) फैलोशिप, एनआईएच AI072817 पुरस्कार (एएमपी) और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन पुरस्कार 0840059N (LJK) विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया.

1. मानव चमड़ी (HFF) fibroblasts लेपित coverslips की तैयारी <ol><li> 24 अच्छी तरह से एक ऊतक संस्कृति की थाली के कुओं के तल पर एक बाँझ दौर कांच coverslip प्लेस. </li><li> एक मिला हुआ 150cm 2 कुप्पी से HFFs फसल, फ्लास्क दो बार और 1X पीबीएस के साथ कुल्ल?...

<ol>
	<li>Tomida, M., Yamamoto-Yamaguchi, Y., Hozumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+a+factor+inducing+differentiation+of+mouse+myeloid+leukemic+M1+cells+from+conditioned+medium+of+mouse+fibroblast+L929+cells.">Purification of a factor inducing differentiation of mouse myeloid leukemic M1 cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells.</a> J Biol Chem. 259 (17), 10978-10980 (1984).</li><li>Matrajt, M., Donald, R. G., Singh, U., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+differentiation+mutants+in+the+protozoan+parasite+Toxoplasma+gondii.">Identification and characterization of differentiation mutants in the protozoan parasite Toxoplasma gondii.</a> Mol Microbiol. 44, 735-747 (2002).</li><li>Singh, U., Brewer, J. L., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+tachyzoite+to+bradyzoite+differentiation+mutants+in+Toxoplasma+gondii+reveals+a+hierarchy+of+gene+induction.">Genetic analysis of tachyzoite to bradyzoite differentiation mutants in Toxoplasma gondii reveals a hierarchy of gene induction.</a> Mol Microbiol. 44, 721-733 (2002).</li><li>J, P., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Toxoplasma+gondii+development+mutants+identifies+a+potential+proteophosphogylcan+that+enhances+cyst+wall+formation.+Molecular+and+Biochemical+Parasitology.">Isolation of Toxoplasma gondii development mutants identifies a potential proteophosphogylcan that enhances cyst wall formation. Molecular and Biochemical Parasitology.</a> 169 (2), 120-123 (2010).</li><li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Bradyzoite-Specific+Toxoplasma+gondii+Antigens+in+Gamma+Interferon-Treated+Mouse+Macrophages.">Induction of Bradyzoite-Specific Toxoplasma gondii Antigens in Gamma Interferon-Treated Mouse Macrophages.</a> Infection and Immunity. 61 (3), 1141-1145 (1993).</li><li>Ibrahim, H. M., Bannai, H., Xuan, X., Nishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+Cyclophilin+18-Mediated+Production+of+Nitric+Oxide+Induces+Bradyzoite+Conversion+in+a+CCR5-Dependent+Manner.">Toxoplasma gondii Cyclophilin 18-Mediated Production of Nitric Oxide Induces Bradyzoite Conversion in a CCR5-Dependent Manner.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3686-3695 (2009).</li><li>Lyons, R. E., McLeod, R., Roberts, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+tachyzoite-bradyzoite+interconversion.">Toxoplasma gondii tachyzoite-bradyzoite interconversion.</a> Trends in Parasitology. 18 (5), 198-201 (2002).</li><li>Berghaus, L. J., Moore, J. N., Hurley, D. J., Vandenplas, M. L., Fortes, B. P., Wolfert, M. A., Boons, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+responses+of+primary+murine+macrophage-lineage+cells+and+RAW+264.7+cells+to+ligands+of+Toll-like+receptors+2,+3,+and+4.">Innate immune responses of primary murine macrophage-lineage cells and RAW 264.7 cells to ligands of Toll-like receptors 2, 3, and 4.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. , (2009).</li><li>Mordue, D. G., Scott-Weathers, C. F., Tobin, C. M., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+patatin-like+protein+protects+Toxoplasma+gondii+from+degradation+in+activated+macrophages.">A patatin-like protein protects Toxoplasma gondii from degradation in activated macrophages.</a> Mol Microbiol. 63 (2), 482-496 (2007).</li><li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+replication+of+Toxoplasma+gondii+is+necessary+for+induction+of+bradyzoite-specific+antigens:+a+possible+role+for+nitric+oxide+in+triggering+stage+conversion.">Reduced replication of Toxoplasma gondii is necessary for induction of bradyzoite-specific antigens: a possible role for nitric oxide in triggering stage conversion.</a> Infection and Immunity. 62 (5), 1761-1777 (1994).</li></ol>

जबकि bradyzoite विकास के तंत्र पूरी तरह समझ नहीं है, टी. के आणविक आनुवांशिक विश्लेषण gondii टिशू कल्चर में मंच रूपांतरण bradyzoite पुटी 2,3,4 गठन में शामिल कर रहे हैं कि जीन की खोज करने के लिए नेतृत्व किया गया है. व?...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bovine serum albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A7906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11960-051</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11150</td>
<td>heat inactivate </td>
</tr>
<tr>
<td>Rhodamine Dolichos biflorus agglutinin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>RL-1032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde (16%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>18814</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP381-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP310-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IFN&gamma;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>315-05</td>
<td>Store in single use aliquots</td>
</tr>
<tr>
<td>L-glutamine (200mM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipopolysaccharide (LPS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L4391-1MG</td>
<td>Store in single use aliquots</td>
</tr>
<tr>
<td>Microscope Cover Glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-545-80 12CIR-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI medium 1640 powder (with L-glutamine, without bicarbonate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>31800-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton-X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP151-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VectaShield mounting media with DAPI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1200</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

toxoplasma gondii cyst wall formation in activated bone marrow-derived macrophages and bradyzoite conditions

Toxoplasma gondii एक लाचार intracellular परजीवी है कि आतशमिज़ाज पशुओं के किसी भी nucleated सेल आक्रमण कर सकते है. संक्रमण के दौरान, टी. gondii प्रसार के रूप में एक तेजी से नकल फार्म tachyzoite बुलाया. Tachyzoites एक धीमी गति से बढ़ रही encysted एक संकेत प्रक्रिया है कि अच्छी तरह से नहीं विशेषता है द्वारा bradyzoite बुलाया रूप में परिवर्तित. पशुओं के भीतर, bradyzoite अल्सर केंद्रीय तंत्रिका तंत्र और मांसपेशियों के ऊतकों में पाया जाता है और संक्रमण के जीर्ण अवस्था का प्रतिनिधित्व करते हैं. Bradyzoites रूपांतरण टिशू कल्चर में सीओ 2 भुखमरी के द्वारा सिम्युलेटेड किया जा सकता है एक उच्च पीएच, या इंटरफेरॉन गामा (IFNγ) के अलावा के साथ माध्यम का उपयोग कर. Bradyzoites एक पुटी दीवार, जो लेक्टिन Dolichos biflorus agglutinin (DBA) बांध की उपस्थिति द्वारा विशेषता है. Fluorescently लेबल DBA मानव चमड़ी (HFFs) fibroblasts है कि कम सीओ 2 और उच्च पीएच मध्यम को उजागर किया गया है में हो परजीवी में पुटी दीवार कल्पना करने के लिए प्रयोग किया जाता है. इसी प्रकार, परजीवी murine अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज (BMMs) में रहने के बाद एक पुटी DBA द्वारा detectable दीवार प्रदर्शित BMMs IFNγ और lipopolysaccharide (LPS) के साथ सक्रिय हैं. इस प्रोटोकॉल का प्रदर्शन कैसे टी. के रूपांतरण उत्पन्न करने के लिए कम सीओ और BMMs के 2 सक्रियण के साथ एक उच्च पीएच मध्यम विकास का उपयोग कर bradyzoites gondii. होस्ट कोशिकाओं coverslips पर सुसंस्कृत हो जाएगा, tachyzoites से संक्रमित और IFNγ और LPS (BMMs) के अलावा के साथ या तो सक्रिय या तीन दिनों के लिए एक उच्च pH वृद्धि मध्यम (HFFs) को उजागर. संक्रमण के पूरा होने पर, मेजबान कोशिकाओं, तय हो जाएगा permeabilized, और अवरुद्ध. पुटी दीवारों प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के साथ rhodamine DBA का उपयोग visualized किया जाएगा.

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Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii पर्यावरण तनाव, जो टिशू कल्चर मॉडल में मजाक उड़ाया जा सकता है के जवाब में एक पुटी के रूप में धर्मान्तरित. यह वीडियो तकनीक दर्शाता है कि अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज सक्रिय या विकास fibroblast कोशिकाओं में मध्यम पीएच बदलने पुटी दीवार गठन की जांच करने के लिए.

सक्रिय अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज और Bradyzoite स्थितियां में Toxoplasma gondii पुटी दीवार संरचना

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

उच्च शुद्ध प्राप्त Toxoplasma gondii एक असंतत सीज़ियम क्लोराइड ढाल द्वारा Oocysts

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan pathogen that commonly infects humans. It is a well characterized apicomplexan associated with ...

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

एक जेनेटिक पृथक करने के लिए स्क्रीन Toxoplasma gondii मेजबान सेल निकास म्यूटेंट

The widespread, obligate intracellular, protozoan parasite Toxoplasma gondii causes opportunistic disease in immuno-compromised patients and causes birth ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज का उपयोग मैक्रोफेज ध्रुवीकरण की जांच

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Genetic Manipulation in &Delta;ku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

में आनुवंशिक हेरफेर<em&gt; Δku80</emके कार्यात्मक जीनोमिक विश्लेषण के लिए&gt; खींच<em&gt; Toxoplasma gondii</em

Targeted genetic manipulation using homologous recombination is the method of choice for functional genomic analysis to obtain a detailed view of gene ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

अस्थि मैक्रोफेज उत्पादन मज्जा व्युत्पन्न

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

अलगाव और murine अस्थि मज्जा की नसों में इंजेक्शन व्युत्पन्न Monocytes

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

फॉरवर्ड जेनेटिक्स पहचानें मैक्रोफेज का प्रयोग स्क्रीन<em&gt; Toxoplasma gondii</em&gt; जीन महत्वपूर्ण प्रतिरोध करने के लिए IFN-γ-निर्भर सेल स्वायत्त प्रतिरक्षण

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

वास्तविक समय कोशिकी फ्लक्स विश्लेषण का उपयोग फूट डालना एम 1 और एम 2 अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मैक्रोफेज की मेटाबोलिक विशेषता

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

Murine अस्थि मज्जा-व्युत्पन्न मैक्रोफेज में Inflammasome सक्रियण और Pyroptotic कोशिका मृत्यु का पता लगाने

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

Isolation and In vitro Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages for the Study of NO-Redox Biology

Isolation and In vitro Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages for the Study of NO-Redox Biology

अलगाव और अस्थि मज्जा की इन विट्रो संस्कृति-व्युत्पन्न मैक्रोफेज NO-Redox जीव विज्ञान के अध्ययन के लिए

Macrophages are derived from hematopoietic progenitor cells throughout the body, are central to inflammatory processes, and participate in innate and ...