Name: multicolor time-lapse imaging of transgenic zebrafish: visualizing retinal stem cells activated by targeted neuronal cell ablation
Uploaded: 2010-09-20T17:00:00
Duration: 10 min 31 s
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我们要感谢博士。米拉Saxena先生和乔纳森有益的意见对稿件恩威。我们感谢博士。迈克尔帕森斯，东区雷蒙德，汪楚萍提供转基因株系。根据批准的协议07-12-003由MCG的IACUC规定的准则和法规进行动物实验* B。这项工作是由美国国立卫生研究院R21 MH083614和3月角钱罗勒Ø康纳入门学者奖的JSM支持

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	<li>K&#246;ster, R. W., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-lapse+microscopy+of+brain+development.">Time-lapse microscopy of brain development.</a> Methods Cell Biol. 76, 207-235 (2004).</li><li>Mumm, J. S., Williams, P. R., Godinho, L., Koerber, A., Pittman, A. J., Roeser, T., Chien, C. B., Baier, H., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+reveals+dendritic+targeting+of+laminated+afferents+by+zebrafish+retinal+ganglion+cells.">In vivo imaging reveals dendritic targeting of laminated afferents by zebrafish retinal ganglion cells.</a> Neuron. 52, 609-621 (2006).</li><li>Curado, S., Anderson, R. M., Jungblut, B., Mumm, J., Schroeter, E., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+targeted+cell+ablation+in+zebrafish:+a+new+tool+for+regeneration+studies.">Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies.</a> Dev Dyn. 236, 1025-1035 (2007).</li><li>Ren, J. Q., McCarthy, W. R., Zhang, H., Adolph, A. R., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+visual+responses+of+wild-type+and+hypopigmented+zebrafish.">Behavioral visual responses of wild-type and hypopigmented zebrafish.</a> Vision Res. 42, 293-299 (2002).</li><li>Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+ablation+of+beta+cells+in+the+embryonic+zebrafish+pancreas+using+E.+Coli+nitroreductase.">Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. Coli nitroreductase.</a> Mech Dev. 124, 218-229 (2007).</li><li>Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>O'Brien, G. S., Rieger, S., Martin, S. M., Cavanaugh, A. M., Portera-Cailliau, C., Sagasti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+axotomy+and+time-lapse+confocal+imaging+in+live+zebrafish+embryos.">Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Vis Exp. , (2009).</li></ol>

JSM nitroreductase总部设在斑马鱼细胞消融系统（玛姆JS和施罗特，EH针对性和区域烧蚀蜂窝消融在斑马鱼“美国专利7514595。2009年4月7）使用已经获得了专利，这种技术是作为一个工具和服务的生物技术公司，Luminomics，公司的JSM成立平台使用的仍然是一个利益相关者英寸

在这段视频中，我们多色共焦成像时间推移和有针对性的细胞消融技术的概述。我们聘请的时间推移成像监测的多种类型的细胞在体内的兴趣行 ​​为，而有针对性的细胞消融是用来研究神经电路功能和细胞特异性的神经再生的范例。这些例子所示突出，可以从这些方法中收集的几个优点。也许最显着，时移成像提供了内部控制的范式;任何及所有现象的观察，可以恢复到以前的状态有关。这使得在实验时间点，直接，而不是推断比较相对变化比较容易量化和减少实验的“噪音”内人口的变化相关。多色成像的优势是可视化交互和/或邻近的细胞类型的变化的能力。例如，使用一个标签米勒的神经胶质细胞的转基因株系，我们现在这些潜在的伤害诱导干细胞特征的离散的视网膜细胞亚群的损失。我们还用这种方法来定义新机制的神经回路的形成2。最后，除了细胞再生的研究，我们最近开始使用消融系统的正常贸易关系为基础的调查从而使用各种行为模式和电生理检测的离散神经回路神经元亚型的职能作用。采用这样的研究斑马鱼的独特优势在于，由于其再生能力，诱导赤字是暂时的。因此，通过时间推移成像检测相关，我们可以典型的神经再支配的机制，导致，以及神经再支配的程度，功能恢复所需。 提供的方法可以适应许多不同的问题。例如，消融和再生的类似分析，可以应用到任何transgenically自定义的细胞亚型。总的来说，这些研究潜力，扩大在单个细胞类型的水平，并在离散的干细胞龛的再生的认识。

1。试剂： Danieau的解决方案： <ul><li>氯化钠（费舍尔，S271 1） </li><li>氯化钾（费舍尔，P217 500） </li><li> HEPES（费舍尔，BP310500） </li><li>硫酸镁（费舍尔，M65的500） </li><li>硝酸钙（费舍尔，C109500） </li><li>青霉素，链霉素（费舍尔ICN1670049） </li></ul>其它试剂： <ul><li>低熔点琼脂糖（费舍尔，BP165 - 25） </li><li> Tricane磺酸（费舍尔NC9435281） </li><li> N -苯基（费舍尔​​NC9968868） </li><li>甲硝唑（费舍尔，AC21034 - 1000） </li></ul> 2。耗材： <ul><li>深培养皿菜（费舍尔科学/康宁，08-772-32） </li><li>杜蒙＃5级罚款钳（费舍尔，NC9404145） </li></ul> 3。设备： <ul><li>变焦体视镜（奥林巴斯，SZ51） </li><li>荧光放大立体（奥林巴斯，SZX16） </li><li>共聚焦显微镜（奥林巴斯FV1000） </li><li>数字块加热器 - Isotemp（费舍尔，11 - 715 - 125DQ） </li><li> Barnstead / Thermolyne台式培养箱（费舍尔，11-702-4）。 </li></ul>

multicolor time-lapse imaging of transgenic zebrafish: visualizing retinal stem cells activated by targeted neuronal cell ablation

高分辨率时间推移斑马鱼幼虫生活的成像可以利用可视化的生物过程如何展开（审查见 1） 。复合转基因鱼在邻近的细胞类型表达不同的荧光记者提供的细胞相互作用2和/或组织水平反应随着时间的推移实验操作的一种手段。在这段视频中，我们证明成像transgenically多个标记的细胞类型，可用于在个别鱼随着时间的推移的课程，可以跨越从几分钟至数天连续的方法。描述的技术适用于任何研究，寻求相关邻近的细胞类型的“行为”随着时间的推移，包括：1）串行“抓了又放”的成像方法大量的鱼，连续几天，2）分离的简化方法重叠的激发/发射的配置文件（如GFP和YFP），3）使用的色素减退突变线延长的时间窗口，可用于高分辨率成像到后期幼体阶段的发展，4）使用有针对性荧光记者透露的膜的荧光基团与罚款形态详细的单个细胞，以及在人口较多的细胞的细胞细节，和5）先前所描述的方法诱导化学消融transgenically有针对性的细胞类型，即nitroreductase（NTR）介导的药物前体基板的转换，如甲硝唑（MTZ），3,5细胞毒素衍生物。 由于这些方法的一个例子，我们将可视化的数天在个别鱼类的视网膜双极神经元亚型的消融和再生。同时，我们会密切留意其他几个视网膜细胞类型，包括邻近的非针对性的双极细胞和潜在的变性刺激视网膜干细胞（即，Mϋller神经胶质细胞）。这一战略被应用在我们的实验室来表征细胞和组织水平（例如，干细胞小生境）的反应选择性的损失和有针对性的神经细胞类型的再生。

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Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

在这个视频，多色共焦成像时间推移和有针对性的细胞消融技术。定时成像是用来监测多种细胞类型的利益的行为<em&gt;在体内</em&gt;。有针对性的细胞消融有利于研究神经回路的功能和细胞特异性神经再生范例。

多色成像定时转基因斑马鱼：可视化由针对性的神经细胞消融激活视网膜干细胞

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

在成年斑马鱼的全肾骨髓移植

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

科研

生物学

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

人类胚胎干细胞的推导Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

双光子现场斑马鱼的胚胎干切断和时间推移共焦成像

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Generation of Human CD40-activated B cells

人CD40激活的B细胞的生成

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

组织有针对性的胚胎嵌合体：斑马鱼原肠胚细胞移植

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

有丝分裂的siRNA转染后的时间推移成像

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

人类胚胎干细胞畸胎瘤形成命运的映射

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

颅面部发育中的SOX10可视化：使用枫转基因斑马鱼线时间推移共聚焦显微镜

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

在造血干细胞和祖细胞的成年小鼠颅骨骨髓体内四维跟踪

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generation of Transgenic Hydra by Embryo Microinjection

Generation of Transgenic Hydra by Embryo Microinjection

转基因的产生<em&gt;水润</em&gt;通过胚胎显微注射

As a member of the phylum Cnidaria, the sister group to all bilaterians, Hydra can shed light on fundamental biological processes shared among ...