Name: multicolor time-lapse imaging of transgenic zebrafish: visualizing retinal stem cells activated by targeted neuronal cell ablation
Uploaded: 2010-09-20T17:00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation at JoVE.com

우리는 DRS 감사하고 싶습니다. 미라 Saxena 및 원고에 도움이 덧글에 대한 조나단 마타. 우리는 DRS 감사합니다. 형질 라인을 제공하는 마이클 파슨스, 파멜라 레이먼, 그리고 레이첼 웡. 동물 실험 프로토콜 07-12-003을 승인 MCG IACUC에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었습니다 * B. 이 작품은 JSM에 NIH R21 MH083614과 천 바실 O 코너 초보 학술 상을 월 지원했습니다

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	<li>K&#246;ster, R. W., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-lapse+microscopy+of+brain+development.">Time-lapse microscopy of brain development.</a> Methods Cell Biol. 76, 207-235 (2004).</li><li>Mumm, J. S., Williams, P. R., Godinho, L., Koerber, A., Pittman, A. J., Roeser, T., Chien, C. B., Baier, H., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+reveals+dendritic+targeting+of+laminated+afferents+by+zebrafish+retinal+ganglion+cells.">In vivo imaging reveals dendritic targeting of laminated afferents by zebrafish retinal ganglion cells.</a> Neuron. 52, 609-621 (2006).</li><li>Curado, S., Anderson, R. M., Jungblut, B., Mumm, J., Schroeter, E., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+targeted+cell+ablation+in+zebrafish:+a+new+tool+for+regeneration+studies.">Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies.</a> Dev Dyn. 236, 1025-1035 (2007).</li><li>Ren, J. Q., McCarthy, W. R., Zhang, H., Adolph, A. R., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+visual+responses+of+wild-type+and+hypopigmented+zebrafish.">Behavioral visual responses of wild-type and hypopigmented zebrafish.</a> Vision Res. 42, 293-299 (2002).</li><li>Pisharath, H., Rhee, J. M., Swanson, M. A., Leach, S. D., Parsons, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+ablation+of+beta+cells+in+the+embryonic+zebrafish+pancreas+using+E.+Coli+nitroreductase.">Targeted ablation of beta cells in the embryonic zebrafish pancreas using E. Coli nitroreductase.</a> Mech Dev. 124, 218-229 (2007).</li><li>Andersen, E., Asuri, N., Clay, M., Halloran, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>O'Brien, G. S., Rieger, S., Martin, S. M., Cavanaugh, A. M., Portera-Cailliau, C., Sagasti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+axotomy+and+time-lapse+confocal+imaging+in+live+zebrafish+embryos.">Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Vis Exp. , (2009).</li></ol>

JSM은 zebrafish의 세포 절제의 nitroreductase 기반 시스템 (멈 JS, 그리고 Schroeter, Zebrafish &quot;미국 특허 7,514,595에서 EH 타겟 지역 박리 세포 절제. 2009년 4월 7일)의 사용에 대한 특허를 획득했습니다.이 기법은 도구 및 JSM은 설립과 서비스를 생명 공학 회사, Luminomics 주식 회사에 대한 일반적인 플랫폼으로 사용하는 것은 인치 이해 관계자 남아

이 비디오에서는, 우리는 여러 가지 빛깔의 공촛점 시간 저속 이미징 및 타겟 세포 절제에 사용 기술의 개요가 제공됩니다. 타겟 세포 절제가 신경 회로 기능과 세포 고유의 연결을 재생 패러다임을 연구하는 데 사용하는 동안 우리는 생체내에 대한 관심의 여러 세포 유형의 동작을 모니터하는 시간 저속 영상을 사용합니다. 예제는 이러한 방식에서 gleaned 수있는 몇 가지 장점을 강조 표시됩니다. 아마도 가장 중요한 시간 경과 영상은 내부 통제 패러다임을 제공 관찰 모든 현상은 이전 상태로 다시 관련되어 있습니다. 이것은 직접보다는 유추 비교가 수치 쉽게 상대적인 변화를 만들고 인구 내에서 변화와 관련된 실험 &#39;소음&#39;을 감소 실험 시간이 지점에 걸쳐 만들 수 있습니다. 여러 가지 빛깔의 이미지의 장점은 상호 작용 및 / 또는 인접 세포 유형의 변화를 시각화하는 능력입니다. 예를 들어, 멀러 glia를 라벨 유전자 변형 라인을 사용하여, 우리는 이제 개별 망막 세포 subpopulations의 손실이 잠재적인 부상을 유발 줄기 세포의 반응을 특성화하고 있습니다. 우리는 또한 신경 회로 형성 2 소설 메커니즘을 정의하기 위해이 방법을 사용했습니다. 마지막으로, 세포 재생 연구 이외에, 우리는 최근의 연결 subtypes의 기능 역할을 다양한 행동 패러다임과 electrophysiological assays을 사용하므로 개별 신경 회로를 조사하기 위해 NTR 기반 절제 시스템을 사용하기 시작했습니다. 이러한 연구 zebrafish을 고용의 독특한 장점은 자신의 재생 능력으로 인해, 유도의 적자가 일시 그입니다. 따라서, 시간 저속 영상 assays과 연관하여 우리는 reinnervation의 메커니즘을 초래할뿐만 아니라, 기능 회복에 필요한 reinnervation의 범위를 typify 수 있습니다. 제공 방법은 여러 가지 질문에 적용할 수 있습니다. 예를 들어, 절제와 중생의 유사한 분석은 어떤 transgenically 정의 셀룰러 subtype에 적용할 수 있습니다. 이하 이러한 연구가 개별 세포 유형의 수준과 이산 줄기 세포 틈새 내에서 재생에 대한 우리의 이해를 확장 가능성이있다.

1. 시약 : Danieau의 솔루션 : <ul><li> 나트륨 염화물 (피셔, S271 1) </li><li> 염화칼륨 (피셔, P217 500) </li><li> HEPES (피셔, BP310500) </li><li> 마그네슘 황산 (피셔, M65 500) </li><li> 칼슘 질산 (피셔, C109500) </li><li> 페니실린 - 스트렙토 마이신 (피셔, ICN1670049) </li></ul> 기타 시약 : <ul><li> 낮은 용융 아가로 오스 (피셔, BP165 - 25) </li><li> Tricane methanesulfonate (피셔, NC9435281) </li><li> N - phenylthiourea (피셔, NC9968868) </li><li> 메트로니다졸 (피셔, AC21034 - 1000) </li></ul> 2. 소모품 : <ul><li> 딥 배양 - 요리 (피셔 과학 / 코닝, 08-772-32) </li><li> 더몬트 # 5 멋진 포셉 (피셔, NC9404145) </li></ul> 3. 장비 : <ul><li> 줌 입체경 (올림푸스, SZ51) </li><li> 형광 줌 입체경 (올림푸스, SZX16) </li><li> 공촛점 현미경 (올림푸스 FV1000) </li><li> 디지털 블록 히터 - Isotemp (피셔, 11-715 - 125DQ) </li><li> 반스 테드 / Thermolyne Benchtop 보육 (피셔, 11-702-4). </li></ul>

multicolor time-lapse imaging of transgenic zebrafish: visualizing retinal stem cells activated by targeted neuronal cell ablation

살아있는 zebrafish의 애벌레의 고해상도 시간 경과 영상은 방법을 생물 학적 과정이 (검토를 위해 1 참조) 펼쳐 시각화에 활용하실 수 있습니다. 이웃 세포 ​​유형에서 다른 형광 기자를 표현 화합물 유전자 변형 물고기는 시간이 지남에 따라 실험적인 조작을 세포 상호 작용이 및 / 또는 조직 수준의 답변을 다음과 같은 수단을 제공합니다. 이 비디오에서는, 우리는 며칠 분 거리에 걸쳐 수있는 시간이 코스를 통해 각각의 물고기에 순차적으로 이미징 여러 transgenically 표시 셀 유형에 대해 사용할 수있는 방법을 보여줍니다. ) 분리에 대한 단순화된 접근 방식 1) 직렬 &#39;잡으 및 릴리스&#39;이미징을위한 방법 연속 일, 2 이상의 물고기가 많은 : 설명 기술을 포함하여, 시간이 지남에 인접한 세포 유형의 &quot;행동&quot;을 상호 연관하고자하는 모든 연구에 적용 중복 여기 / 방출 프로파일 (예 : GFP 및 YFP), 3) 개발, 4 후반 애벌레 단계로 고해상도 이미징을위한 시간 창 사용할 수 연장 hypopigmented 돌연변이 라인의 사용) 형광 기자가 공개를 타겟으로 막의 사용 fluorophores 개별 세포뿐만 아니라 세포의 큰 인구에있는 세포 자세한 내용 및 transgenically 타겟 세포 유형의 화학을 이용한 절제 5) 이전에 설명한 방법을 잘 형태학의 세부 사항; 같은 메트로니다졸 같은 즉, nitroreductase (NTR) prodrug 기판의 중재 변환, (MTZ), 세포 독성 파생 3,5 수 있습니다. 이러한 접근 방법의 예를 들어, 우리는 며칠 동안 개별 생선 이내에 망막 신경 세포 양극성의 subtype의 절제와 재생을 시각화합니다. 동시에 우리는 이웃 아닌 타겟 바이폴라 전지 및 잠재적인 변성 자극 망막 줄기 세포 (즉, Mϋller의 glia)을 포함한 여러 다른 망막 세포 유형을 모니터합니다. 이 전략은 타겟의 연결을 세포 유형의 선택 상실과 재생을 세포 및 조직 수준 (예를 들어, 줄기 세포 틈새) 응답을 특성화하기 위해 실험실에 적용되고 있습니다.

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Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

이 비디오에서는 여러 가지 빛깔의 공촛점 시간 저속 이미징 및 타겟 세포 절제에 대한 기술이 제공됩니다. 시간 저속 영상은 관심의 여러 세포 유형의 동작을 모니터하는 데 사용됩니다<em&gt; 생체내에</em&gt;. 타겟 세포 절제는 학습 신경 회로 기능과 세포 고유의 연결을 재생 패러다임을 용이하게합니다.

트렌스 제닉 Zebrafish의 여러 가지 빛깔의 시간 저속 영상 : 타겟의 연결을 세포 절제에 의해 활성화 떠올리 망막 줄기 세포

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

성인 Zebrafish의 전체 신장 마로우의 이식

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

연구

생물학

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

라이브 zebrafish의 배아에서 두 광자의 axotomy하고 시간이 경과 공촛점 영상

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Generation of Human CD40-activated B cells

인간 CD40 - 활성화된 B 세포의 생성

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

조직 타겟 배아 Chimeras : Zebrafish Gastrula 세포 이식

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

siRNA Transfection 후의 유사 분열의 시간 저속 영상

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

sox10의 두개 안면 개발의 시각화 : 단풍 나무 형질 전환 제브라 피쉬의 선은 시간 경과 공 초점 현미경을 사용하여

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

성인 마우스 두개골 골수에서 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 4 차원 추적에서

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generation of Transgenic Hydra by Embryo Microinjection

Generation of Transgenic Hydra by Embryo Microinjection

형질 전환의 세대<em&gt; 히드라</em&gt; 배아 미세 주입에 의해

As a member of the phylum Cnidaria, the sister group to all bilaterians, Hydra can shed light on fundamental biological processes shared among ...