Name: bacterial delivery of rnai effectors: transkingdom rnai
Uploaded: 2010-08-18T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi at JoVE.com

העבודה נתמכה על ידי מענק לא. 01GU0615 של &quot;Bundesministerium für und Forschung Technologie (BMBF).

1) משלוח חיידקית של shRNAs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני שמתחילים עם התרבות חיידקים, יש להכין LB-בינוני LB-אגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור LB-בינוני לשקול את תמצית שמרים (0.5% w / v), bacto tryptone (1.0% w / v), ואת NaCl (0.6% w / v) לדלל ברכיבים אלה אקווה bidest. הפתרונות צ...

<ol>
	<li>Kr&#252;hn, A., Wang, A., Fruehauf, J. H., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+short+hairpin+RNAs+by+transkingdom+RNA+interference+modulates+the+classical+ABCB1-mediated+multidrug-resistant+phenotype+of+cancer+cells.">Delivery of short hairpin RNAs by transkingdom RNA interference modulates the classical ABCB1-mediated multidrug-resistant phenotype of cancer cells.</a> Cell Cycle. 8, 3349-3354 (2009).</li><li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MDR1/P-glycoprotein+(ABCB1)+as+target+for+RNA+interference-mediated+reversal+of+multidrug+resistance.">MDR1/P-glycoprotein (ABCB1) as target for RNA interference-mediated reversal of multidrug resistance.</a> Curr. Drug Targets. 7, 813-821 (2006).</li><li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+cancer+multidrug+resistance:+a+still+unsolved+problem.">An overview of cancer multidrug resistance: a still unsolved problem.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65, 3145-3167 (2008).</li><li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+RNA+interference+in+drug-resistant+cancers.">Therapeutic potential of RNA interference in drug-resistant cancers.</a> Fut. Oncol. 5, 169-185 (2009).</li><li>Nguyen, T. A., Fruehauf, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transkingdom+RNA+interference+(tkRNAi):+a+novel+method+to+induce+therapeutic+gene+silencing.">Transkingdom RNA interference (tkRNAi): a novel method to induce therapeutic gene silencing.</a> Methods Mol. Biol. 514, 27-34 (2009).</li><li>Nieth, C., Priebsch, A., Stege, A., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+classical+multidrug+resistance+(MDR)+phenotype+by+RNA+interference+(RNAi.">Modulation of the classical multidrug resistance (MDR) phenotype by RNA interference (RNAi.</a> FEBS Lett. 545, 144-150 (2003).</li><li>Stege, A., Priebsch, A., Nieth, C., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+and+complete+overcoming+of+MDR1/P-glycoprotein-mediated+multidrug+resistance+in+human+gastric+carcinoma+cells+by+RNA+interference.">Stable and complete overcoming of MDR1/P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in human gastric carcinoma cells by RNA interference.</a> Cancer Gene Ther. 11, 699-706 (2004).</li><li>Stein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+in+vivo+reversal+of+the+multidrug+resistance+(MDR)+phenotype+by+jet-injection+of+anti-MDR1+short+hairpin+RNA-encoding+plasmid+DNA.">Complete in vivo reversal of the multidrug resistance (MDR) phenotype by jet-injection of anti-MDR1 short hairpin RNA-encoding plasmid DNA.</a> Mol. Ther. 16, 178-186 (2008).</li><li>Xiang, S., Fruehauf, J., Li, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+hairpin+RNA-expressing+bacteria+elicit+RNA+interference+in+mammals.">Short hairpin RNA-expressing bacteria elicit RNA interference in mammals.</a> Nat. Biotechnol. 24, 697-702 (2006).</li></ol>

מספר תא זרע עבור זיהום הפנים המקביל בשימוש, ביקורתי תלוי שורות תאים תחת תצפית מהירותם של צמיחה. כדי למצוא מספרים תא האופטימלי עבור זריעה, טרום ניסויים כדי לקבוע את המהירות של הצמיחה מומלץ מאוד. מלבד זאת, MOIs שונים יש לבדוק בשל מוגבלת להאריך אשר התאים יכול לסבול את הפליש...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>214050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amphotericin B</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>A2612</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline-PBS (10 x)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen GmbH</td>
<td>14080048</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E. coli ceq221</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cequent Pharmaceuticals Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>No catalogue available, direct order</td>
</tr>
<tr>
<td>Gentamycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>A2710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen GmbH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contains 5,000 units of penicillin (base) and 5,000 &mu;g of streptomycin (base)/ml utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline.</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Merck KgaA</td>
<td>1064060500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tryptone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Difco Laboratories</td>
<td>211705</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Difco Laboratories</td>
<td>212750</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

bacterial delivery of rnai effectors: transkingdom rnai

התערבות RNA (RNAi) מהווה מנגנון אפקטיבי גבוה עיכוב מסוים של ביטוי ה-mRNA. מלבד הפוטנציאל שלו ככלי מעבדה עוצמה, מסלול RNAi נראה מבטיח ניצול טיפולית. עבור פיתוח של התערבות RNA (RNAi) טיפולים מבוססי, המסירה של RNAi-בתיווך סוכני לתאי המטרה היא אחד המכשולים העיקריים. אסטרטגיה הרומן להתגבר על המשוכה הזאת הוא transkingdom RNAi (TK RNAi). טכנולוגיה זו משתמשת פתוגניים שאינם חיידקים, למשל Escherichia coli, לייצר ולספק טיפולית מכבנה RNA קצר (shRNA) לתאי מטרה לגרום RNAi. הדור הראשון TK-RNAi מתווך, טיול וקטור, מכיל את מקדם T7 bacteriophage להסדרת ביטוי shRNA טיפולית של עניין. יתר על כן, תשמ&quot;ה אינו מוקד Inv מ pseudotuberculosis Yersinia המקודד invasin, המאפשר לחיידקים פולשנית טבעי להיכנס β1-integrin חיוביים בתאי יונקים ואת הגן HlyA מ חיידקי ליסטריה, אשר מייצרת listeriolysin O. אנזים זה מאפשר shRNA טיפולית לברוח כניסה שלפוחית ​​בתוך הציטופלסמה של תא המטרה. בונה תשמ&quot;ה מוכנסים זן המוסמכת Escherichia coli שאינם פתוגניים, אשר מקודד T7 RNA פולימראז הכרחי לסינתזה T7 האמרגן מונחה של shRNAs. היטב מאופיין סרטן הקשורים מולקולה יעד שונים אסטרטגיות RNAi הוא ABCB1 (MDR1/P-glycoprotein, MDR1/P-gp). זה טרנספורטר-ABC משמש משאבה תרופה שחול ומתווך &quot;קלאסיים&quot; ABCB1 בתיווך multidrug ההתנגדות (MDR) הפנוטיפ של תאים סרטניים אנושיים אשר מאופיינת דפוס לחצות התנגדות ספציפית. ABCB1-לבטא בתאי סרטן שונים MDR טופלו אנטי ABCB1 וקטור shRNA ביטוי נושאות E. coli. הליך זה הביא הפעלת המסלולים RNAi בתוך התאים הסרטניים תקנה מטה ניכר של mRNA ABCB1 את הקידוד כמו גם את המשאבה המתאימה שחול סמים. בהתאם לכך, הצטברות התרופה היה משופר של עמידות לתרופות בתאים סרטניים וטהור לבין פנוטיפ MDR התהפכה. באמצעות מודל זה הנתונים מספקים הוכחה של קונספט זה TK RNAi מתאים אפנון של סרטן הקשורים גורמים, כגון ABCB1, בתאי סרטן אנושיים.

Watch this Scientific Journal Video about Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi at JoVE.com

Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

עבור פיתוח של התערבות RNA (RNAi) טיפולים מבוססי, אסטרטגיה רומן פותחה, transkingdom RNAi (tkRNAi). טכנולוגיה זו משתמשת פתוגניים שאינם חיידקים כדי לייצר ולספק טיפולית מכבנה RNA קצר (shRNA) לתאי המטרה. כאן, tkRNAi יושמה בהצלחה היפוך ההתנגדות ABCB1 בתיווך קלאסית multidrug (MDR) של תאים סרטניים.

משלוח חיידקית של RNAi effectors: Transkingdom RNAi

RNA interference (RNAi) represents a high effective mechanism for specific inhibition of mRNA expression. Besides its potential as a powerful laboratory ...

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for RNAi Assays in Adult Mosquitoes (A. gambiae)

Protocol for RNAi Assays in Adult Mosquitoes A. gambiae

פרוטוקול מבחני RNAi ב למבוגרים יתושים (א gambiae)

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

לוקליזציה RNAi ו ביטוי גנים מחוץ לרחם של עלוקה מרפא

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

Identification of Growth Inhibition Phenotypes Induced by Expression of Bacterial Type III Effectors in Yeast

זיהוי של פנוטיפים עיכוב גדילה מושרה על ידי הבעת effectors סוג חיידקית השלישי שמרים

Many Gram-negative pathogenic bacteria use a type III secretion system to translocate a suite of effector proteins into the cytosol of host cells. Within ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

המשימה esiRNA עבור הקרנת RNAi בתאי יונקים

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

RNAi Interference by dsRNA Injection into Drosophila Embryos

RNAi הפרעה על ידי הזרקה לתוך dsRNA תסיסנית עוברים

Genetic screening is one of the most powerful methods available for gaining insights into complex biological process 1. Over the years many improvements ...

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi מתווכת מציאה ין Transgenesis ידי Microinjection ב נמטודות Necromenic Pristionchus פקיפיקוס</em

Although it is increasingly affordable for emerging model organisms to obtain completely sequenced genomes, further in-depth gene function and expression ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi הקרנת לזהות פנוטיפים Postembryonic ב ג elegans</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

כמותיים אוטומטי תפוקה גבוהה הגנום כולו RNAi המסכים ג elegans</em

RNA interference is a powerful method to understand gene function, especially when conducted at a whole-genome scale and in a quantitative context. In C. ...

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

RNAi בתיווך ג&#39;ין מציאה ו<em&gt; In vivo</em&gt; Diuresis Assay ב נקבה בוגרת<em&gt; Aedes aegypti</em&gt; יתושים

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Phosphopeptide Analysis of Rodent Epididymal Spermatozoa

ניתוח Phosphopeptide של מכרסמים epididymal תאים-זרע

Spermatozoa are quite unique amongst cell types. Although produced in the testis, both nuclear gene transcription and translation are switched off once ...