Name: bacterial delivery of rnai effectors: transkingdom rnai
Uploaded: 2010-08-18T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi at JoVE.com

作業は、助成金なしでサポートされていました。 &quot;BundesministeriumこだわりForschungウントTechnologie（BMBF）の01GU0615。

shRNAの1）細菌配達<ol><li>細菌培養を開始する前に、一つはLB -培地およびLB -寒天を準備する必要があります。 </li><li> LB -培地は、酵母エキス（0.5％w / v）の、バクトトリプトン（1.0％w / v）を、およびNaCl（0.6％w / v）の検量するとアクアbidestでこれらのコンポーネントを希釈するため。調製された溶液は、オートクレーブで滅菌する必要がありますし、使用する準備が整いました。 </li><li> LB ...

<ol>
	<li>Kr&#252;hn, A., Wang, A., Fruehauf, J. H., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+short+hairpin+RNAs+by+transkingdom+RNA+interference+modulates+the+classical+ABCB1-mediated+multidrug-resistant+phenotype+of+cancer+cells.">Delivery of short hairpin RNAs by transkingdom RNA interference modulates the classical ABCB1-mediated multidrug-resistant phenotype of cancer cells.</a> Cell Cycle. 8, 3349-3354 (2009).</li><li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MDR1/P-glycoprotein+(ABCB1)+as+target+for+RNA+interference-mediated+reversal+of+multidrug+resistance.">MDR1/P-glycoprotein (ABCB1) as target for RNA interference-mediated reversal of multidrug resistance.</a> Curr. Drug Targets. 7, 813-821 (2006).</li><li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+cancer+multidrug+resistance:+a+still+unsolved+problem.">An overview of cancer multidrug resistance: a still unsolved problem.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65, 3145-3167 (2008).</li><li>Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+RNA+interference+in+drug-resistant+cancers.">Therapeutic potential of RNA interference in drug-resistant cancers.</a> Fut. Oncol. 5, 169-185 (2009).</li><li>Nguyen, T. A., Fruehauf, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transkingdom+RNA+interference+(tkRNAi):+a+novel+method+to+induce+therapeutic+gene+silencing.">Transkingdom RNA interference (tkRNAi): a novel method to induce therapeutic gene silencing.</a> Methods Mol. Biol. 514, 27-34 (2009).</li><li>Nieth, C., Priebsch, A., Stege, A., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+the+classical+multidrug+resistance+(MDR)+phenotype+by+RNA+interference+(RNAi.">Modulation of the classical multidrug resistance (MDR) phenotype by RNA interference (RNAi.</a> FEBS Lett. 545, 144-150 (2003).</li><li>Stege, A., Priebsch, A., Nieth, C., Lage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+and+complete+overcoming+of+MDR1/P-glycoprotein-mediated+multidrug+resistance+in+human+gastric+carcinoma+cells+by+RNA+interference.">Stable and complete overcoming of MDR1/P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in human gastric carcinoma cells by RNA interference.</a> Cancer Gene Ther. 11, 699-706 (2004).</li><li>Stein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+in+vivo+reversal+of+the+multidrug+resistance+(MDR)+phenotype+by+jet-injection+of+anti-MDR1+short+hairpin+RNA-encoding+plasmid+DNA.">Complete in vivo reversal of the multidrug resistance (MDR) phenotype by jet-injection of anti-MDR1 short hairpin RNA-encoding plasmid DNA.</a> Mol. Ther. 16, 178-186 (2008).</li><li>Xiang, S., Fruehauf, J., Li, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+hairpin+RNA-expressing+bacteria+elicit+RNA+interference+in+mammals.">Short hairpin RNA-expressing bacteria elicit RNA interference in mammals.</a> Nat. Biotechnol. 24, 697-702 (2006).</li></ol>

使用される感染症とそれに対応するMOIための播種細胞数は、批判的に細胞観察の下に線との成長の速度に依存する。シードに最適な細胞数を検索するには、事前に実験の成長の速度を決定することが強く推奨されています。このほかに、別の湿気が原因で細胞がストレスで死ぬことなく、細菌の侵入に耐えることができるためにどの拡張限定にテストする必要があります。観察下にある遺伝?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>214050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Amphotericin B</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>A2612</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline-PBS (10 x)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen GmbH</td>
<td>14080048</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E. coli ceq221</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cequent Pharmaceuticals Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>No catalogue available, direct order</td>
</tr>
<tr>
<td>Gentamycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biochrom AG</td>
<td>A2710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen GmbH</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Contains 5,000 units of penicillin (base) and 5,000 &mu;g of streptomycin (base)/ml utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline.</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Merck KgaA</td>
<td>1064060500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tryptone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Difco Laboratories</td>
<td>211705</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast Extract</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Difco Laboratories</td>
<td>212750</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

bacterial delivery of rnai effectors: transkingdom rnai

RNA干渉（RNAi）は、mRNA発現の特異的阻害のための高い効果的なメカニズムを表します。強力な実験ツールとしての可能性に加えて、RNAi経路は、治療の利用のために有望なように見えます。 RNA干渉（RNAi）ベースの治療法の開発のため、標的細胞へのRNAiを媒介剤の送達は、大きな障害の一つです。このハードルを克服する新たな戦略は、transkingdomのRNAi（RNA干渉TK）です。この技術は、生産し、RNAiを誘導する標的細胞への治療短鎖ヘアピンRNA（shRNA）を提供するために、非病原性の細菌、例えば大腸菌（Escherichia coli）を使用しています。第一世代のTK RNAiを媒介ベクトル、TRIPは、関心の治療shRNAの発現調節のためのバクテリオファージT7プロモーターが含まれています。また、TRIPは、この酵素listeriolysin Oを生成するリステリア菌からβ1-インテグリン陽性哺乳類細胞とHlyAの遺伝子を、入力するように自然な非侵襲的な細菌を許可するインベイシンをコードエルシニア偽結核からInv遺伝子座を、持って治療したshRNAがから脱出することができますエントリは、標的細胞の細胞質内小胞。 TRIPコンストラクトはshRNAのT7プロモータードリブン合成に必要なT7 RNAポリメラーゼをコードして有能な非病原性大腸菌の菌株に導入されています。異なるRNAiの戦略のための十分に特徴付けられた癌関連標的分子は、ABCB1（MDR1/P-glycoprotein、MDR1/P-gp）です。薬剤の押し出しポンプとを仲介する&quot;古典的&quot;ABCB1を介した多剤耐性（MDR）特定の交差抵抗性パターンによって特徴付けられるヒト癌細胞の表現型としてこのABCトランスポーターの役割を果たします。異なるABCB1発現MDR癌細胞を抗ABCB1 shRNAの発現ベクターベアリングE.で処理した大腸菌 。この手順では、がん細胞とABCB1コードmRNAと同様に対応する薬剤の押し出しポンプのかなりのダウンレギュレーション内のRNAi経路の活性化をもたらした。したがって、薬物の蓄積は、原始的な薬剤耐性癌細胞で強化され、MDRの表現型を逆転した。このモデルにより、データはtkの RNAiがヒト癌細胞における癌関連因子、例えば、ABCB1、の変調に適していることが証明の概念を提供しています。

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Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

RNA干渉（RNAi）ベースの治療法の開発のための、新たな戦略が開発された、transkingdomのRNAi（tkRNAi）。この技術は、生産し、標的細胞への治療短鎖ヘアピンRNA（shRNA）を提供する非病原性細菌を使用しています。ここで、tkRNAiが正常に癌細胞の古典的なABCB1を介した多剤耐性（MDR）の反転を適用した。

RNAiのエフェクターの細菌配達：Transkingdom RNAiの

RNA interference (RNAi) represents a high effective mechanism for specific inhibition of mRNA expression. Besides its potential as a powerful laboratory ...

Research

JoVE Journal

Biology

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