Name: in vivo micro-circulation measurement in skeletal muscle by intra-vital microscopy
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy at JoVE.com

<p> Vi tackar JW Lichtman om hans råd i in vivo-observation av muskler. </p>

<p class="jove_step"> RBC membranfärgning </p><ol><li> Mus röda blodkroppar korrigerades från samma musstam med heparin. </li><li> Mus RBC färgades med PKH26 färgämne (551/567 nm, Röd fluorescerande celler länkare kit, Sigma, USA). </li><li> RBC spolades i PBS och inkuberas med 2μM lösning av PKH26 färg i 5 minuter i rumstemperatur. Reaktionen stoppades genom att lägga till plasma (värmeinaktiverad i 1 timme vid 65 ° C i förväg) och inkuberas under 1 minut. </li><li> Den färgade RBC spolades 5 gånger med PBS. </li></ol><p clas...

<ol>
	<li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice.">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci</em>. <b>7</b>, 1215-1222 (1987).</li></ol>

<p> Viktiga techinical punkter är följande: (1) underhåll av fysiologisk status för djur (ventilation, pH-värde perfusative lösningen, kroppstemperatur), (2) injektionsvolym av de färgade RBC, och (3) förutsättningar för observation (optimal lins urval, fluorescensintensiteten). Potentiella framtida tillämpningar är följande: (a) kombination med pharmacophysiological och / eller molekylärbiologiska insatser, (b) långvarig observation av arteriell / arteriolo-skleros och kärlnybildning. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PKH26 dye </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>551/567 nm; Red fluorescent cell linker kit</td>
</tr>
<tr>
<td>C57BL/10 mice </td>
<td>Animal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Three to six month old males</td>
</tr>
<tr>
<td>pentobarbital </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>anesthetic, 50mg/kgBW, i.p.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

in vivo micro-circulation measurement in skeletal muscle by intra-vital microscopy

<p class="jove_content"> BAKGRUND: Regulatoriska faktorer och detaljerade fysiologi av in vivo mikrocirkulationen har varit inte helt klarlagts efter många olika former av avbildning hade uppfunnit. Medan många makroskopiska parametrar blodflödet avspeglar flödeshastighet, förändringar i blodets strömningshastighet och röda blodkroppar (RBC) flux håller inte linjärt samband i mikroskopiska observationer. Det finns rapporter om diskrepans mellan RBC hastighet och RBC flux, RBC flux och plasma flöde volym, och tid och rum heterogena flödesreglering i perifera vävnader i mikroskopiska observationer, en vetenskaplig grund för kravet på mer detaljerade studier i mikrocirkulationen reglering med hjälp av intravital mikroskopi. </p><p class="jove_content"> METODER: Vi ändrade Jeff Lichtman metod av in vivo mikroskopisk observation av muskler mus sternocleidomastoideus. Möss är sövda, ventilerade och injiceras med PKH26L-fluorescerande röda blodkropparna för mikroskopisk observation. </p><p class="jove_content"> RESULTAT &amp; SLUTSATSER: fluorescerande röda blodkroppar upptäcks och kännetecknas även av ett brett fält mikroskop. Muskelsammandragning framkallas genom elektrisk stimulering ökar RBC flux. Kvantifiering av andra parametrar, bland annat RBC hastighet och kapillär densitet var möjligt. Möss tolereras väl operationen, injektion av färgade röda blodkropparna, mikroskopisk observation, och elektrisk stimulering. Inga muskler eller blodkärl skada observerades, vilket tyder på att vår metod är relativt sett mindre invasiv och lämpar sig för långsiktiga observationer. </p>

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy at JoVE.com

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

<p class="jove_content">En ny mångsidig metod för observation av mikrocirkulation presenteras. Det anses lämpliga för observation under lång tid, och för kombination med pharmacophysiological eller molekylärbiologiska interventioner.</p>

In vivo Micro-cirkulation Mätning i skelettmuskel genom Intra-vitala Mikroskopi

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by <em>In Vivo</em> Fluorescent Imaging

Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by In Vivo Fluorescent Imaging

Spårning Dynamics of Muscle engraftment i Small Animals av<em> In Vivo</em> Lysrör Imaging

Muscular dystrophies are a group of degenerative muscle diseases characterized by progressive loss of contractile muscle cells. Currently, there is no ...

Procedures for Rat <em>in situ</em> Skeletal Muscle Contractile Properties

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties

Förfaranden för råtta<em&gt; In situ</em&gt; Skelettmuskulaturen Kontraktila egenskaper

There are many circumstances where it is desirable to obtain the contractile response of skeletal muscle under physiological circumstances: normal ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescens-baserad Mätning av Store-drivs kalcium Entry i levande celler: från odlade Cancer Cell till skelettmuskulatur Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

<em>Ex Vivo</em> Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

<em>Ex vivo</em> Bedömning av kontraktilitet, fatigability och Alternans i isolerade skelettmuskler

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

I Intakta Skeletal Muscle Fibers Bedömning av Kalcium Sparks

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Analysis of Skeletal Muscle Defects in Larval Zebrafish by Birefringence and Touch-evoke Escape Response Assays

Zebrafish (Danio rerio) have become a particularly effective tool for modeling human diseases affecting skeletal muscle, including muscular ...

<em>In vivo</em> Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

<em>In vivo</em> Klon Spårning av hematopoetiska stam och progenitorceller märkta med fem fluorescerande proteiner med hjälp Konfokal och multifoton mikroskopi

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

<em>In Vivo</em> 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

Mätning av mikrotubuli dynamik genom spinning disk mikroskopi i monopolär mitotiska spindlar

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...

Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice

Mätning av insulin- och sammandragningsstimulerat glukosupptag i isolerade och inkuberade mogna skelettmuskler från möss

Skeletal muscle is an insulin-responsive tissue and typically takes up most of the glucose that enters the blood after a meal. Moreover, it has been ...