Name: visualization of larval segmental nerves in 3rd instar drosophila larval preparations
Uploaded: 2010-09-29T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations at JoVE.com

SG est soutenu par des fonds de l&#39;Université d&#39;État de New York à Buffalo et de la Fondation John R. Oishei.

1. Préparation des réactifs <ol><li> Préparer 1x tampon Dissection utilisant 128 mM de NaCl, 4mm CaCl 2, 4mm MgCl2, 2 mM de KCl, HEPES 5mm et 36mm saccharose. PH de la solution à 7,2 et stériliser par filtration. </li><li> Préparer le fixateur en utilisant une dilution 1:01 de formaldéhyde 16% et le tampon de dissection 1x. </li><li> Préparer 1x PBT aide 1x tampon phosphate salin (PBS) à un pH de 7,2 et de Triton X-100 dans un rapport 1:100. </li><li> Préparer 5% albumine sérique bovin...

<ol>
	<li>Gunawardena, S., Goldstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Axonal+Transport+and+Neuronal+Viability+by+Amyoid+Precursor+Protein+Mutations+in+Drosophila.">Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila.</a> Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).</li><li>Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).</li><li>Hurd, D. D., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+mutations+cause+motor+neuron+disease+phenotypes+by+disrupting+fast+axonal+transport+in+Drosophila.">Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila.</a> Genetics. 144 (3), 1075-1085 (1996).</li><li>Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paralysis+and+early+death+in+cysteine+string+protein+mutants+of+Drosophila.">Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila.</a> Science. 263, 977-980 (1994).</li></ol>

Les nerfs des larves de drosophile sont segmentaires un système puissant pour étudier les mécanismes de transport axonal. Si la 3 e stade larvaire dissection est effectuée correctement, toutes les composantes de la CNS, PNS, et des tissus associés, tels que les muscles et les NMJs, peuvent être examinées dans une seule larve. Nous avons adapté ce protocole de celui publié par Hurd et Saxton (1996). Ce protocole peut également être adapté pour tester d&#39;autres anticorps neuronale, mais ...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dumont #5 Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minutien Pins, Stainless Steel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>50822236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, Mounting Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories, Inc.</td>
<td>H-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicone elastomer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning Corporation</td>
<td>4026148</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>formaldehyde, 16%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>dCSP3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-11004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

visualization of larval segmental nerves in 3rd instar drosophila larval preparations

Drosophila melanogaster apparaît comme un système modèle puissant pour étudier le développement et la fonction du système nerveux, notamment en raison de sa génétique commode et génome entièrement séquencé. De plus, le système nerveux des larves est un système modèle idéal pour étudier les mécanismes du transport axonal que les nerfs des larves segmentaire contiennent faisceaux d&#39;axones avec leurs corps cellulaires situés dans le cerveau et leurs terminaisons nerveuses finissant le long du corps. Nous décrivons ici la procédure pour la visualisation des protéines des vésicules synaptiques dans les larves de nerfs segmentaires. Si fait correctement, tous les composants du système nerveux, avec des tissus associés tels que les muscles et NMJs, restent intacts, intact et prêt à être visualisé. 3 e stade larvaire porteuses de mutations différentes sont disséqués, fixe, incubées avec des anticorps vésicules synaptiques, visualisées et comparées à des larves de type sauvage. Cette procédure peut être adaptée pour plusieurs anticorps différents synaptique ou neuronales et des changements dans la distribution d&#39;une variété de protéines peuvent être facilement observées au sein des larves nerfs segmentaires.

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Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Drosophila melanogaster larves fournir un système modèle idéal pour étudier les mécanismes du transport axonal dans les larves de nerfs segmentaires. En utilisant cette procédure, 3 e stade larvaire porteuses de mutations différentes peuvent être comparés à des larves de type sauvage.

Visualisation des larves nerfs segmentaires en 3 Rd Instar Drosophile Les préparatifs des larves

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

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Visualisation in vivo des vésicules synaptiques Dans Drosophila larves axones segmentaire

Elucidating the mechanisms of axonal transport has shown to be very important in determining how defects in long distance transport affect different ...

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