Name: visualization of larval segmental nerves in 3rd instar drosophila larval preparations
Uploaded: 2010-09-29T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations at JoVE.com

SG wird durch Mittel aus der State University of New York at Buffalo und von John R. Oishei Foundation unterstützt.

1. Vorbereitung der Reagenzien <ol><li> Bereiten 1x Dissection Buffer mit 128 mM NaCl, 4mm CaCl 2, 4mm MgCl 2, 2 mM KCl, 5 mM HEPES und 36mm Sucrose. PH der Lösung auf 7,2 und Filter zu sterilisieren. </li><li> Bereiten Sie das Fixiermittel mit 1:1-Verdünnung von 16% Formaldehyd und 1x Dissection Buffer. </li><li> Bereiten 1x PBT mit 1x Phosphate Buffered Saline (PBS) bei einem pH von 7,2 und Triton X-100 in einer 1:100-Verhältnis. </li><li> Bereiten Sie 5% Rinderserumalbumin (BSA) mit 0,01% N...

<ol>
	<li>Gunawardena, S., Goldstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Axonal+Transport+and+Neuronal+Viability+by+Amyoid+Precursor+Protein+Mutations+in+Drosophila.">Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila.</a> Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).</li><li>Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).</li><li>Hurd, D. D., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+mutations+cause+motor+neuron+disease+phenotypes+by+disrupting+fast+axonal+transport+in+Drosophila.">Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila.</a> Genetics. 144 (3), 1075-1085 (1996).</li><li>Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paralysis+and+early+death+in+cysteine+string+protein+mutants+of+Drosophila.">Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila.</a> Science. 263, 977-980 (1994).</li></ol>

Die Drosophila Larve segmentalen Nerven sind ein leistungsfähiges System, Mechanismen in axonalen Transport zu studieren. Wenn die 3 rd instar Larven Dissektion korrekt durchgeführt wird, können alle Komponenten des ZNS, PNS, und die damit verbundenen Gewebe, wie die Muskeln und NMJs, innerhalb einer einzigen Larve untersucht werden. Wir haben dieses Protokoll von der von Hurd und Saxton (1996) veröffentlicht angepasst. Dieses Protokoll kann auch angepasst werden andere neuronale Antikörper-Test...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dumont #5 Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
<td>11252-20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minutien Pins, Stainless Steel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools, Inc.</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>50822236</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield, Mounting Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories, Inc.</td>
<td>H-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicone elastomer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning Corporation</td>
<td>4026148</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>formaldehyde, 16%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>dCSP3</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-11004</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

visualization of larval segmental nerves in 3rd instar drosophila larval preparations

Drosophila melanogaster ist ein leistungsfähiges Modell für die Untersuchung der Entwicklung und Funktion des Nervensystems, vor allem wegen seiner günstigen Genetik und vollständig sequenzierten Genoms entstehen. Darüber hinaus ist die Larve des Nervensystems ein ideales Modellsystem, um Mechanismen der axonalen Transport Studie als Larven segmentalen Nerven Bündel von Axonen mit ihrem Zellkörper im Gehirn und die Nerven-Terminals endet entlang der Länge des Körpers befindet enthalten. Hier beschreiben wir das Verfahren zur Visualisierung der synaptischen Vesikel Proteine ​​innerhalb Larven segmentalen Nerven. Wenn es richtig gemacht, alle Komponenten des Nervensystems, zusammen mit der dazugehörigen Gewebe wie Muskeln und NMJs, bleiben intakt und unbeschädigt, und bereit, visualisiert werden. 3 rd Larvenstadium, die verschiedene Mutationen seziert werden, fest, inkubiert mit synaptischen Vesikel Antikörper, visualisiert und im Vergleich zum Wildtyp-Larven. Dieser Vorgang kann für mehrere verschiedene synaptischen oder neuronalen Antikörpern und Veränderungen in der Verteilung einer Vielzahl von Proteinen angepasst werden können innerhalb von Larven segmentalen Nerven beobachtet werden.

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Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Drosophila melanogaster-Larven bieten ein ideales Modellsystem, um die Mechanismen der axonalen Transport innerhalb Larven segmentalen Nerven zu untersuchen. Mit diesem Verfahren können 3 rd Larvenstadium, die verschiedene Mutationen zu Wildtyp-Larven verglichen werden.

Visualisierung von Larven segmentalen Nerven in 3 Rd Instar Drosophila Larven Vorbereitungen

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

In-vivo-Visualisierung von synaptischen Vesikeln Innerhalb Drosophila Larven Segmentale Axone

Elucidating the mechanisms of axonal transport has shown to be very important in determining how defects in long distance transport affect different ...

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The Gal4/ UAS binary method is powerful for gene and neural circuitry manipulation in Drosophila. For most neurobiological studies, however, Gal4 ...

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Dissektion und Immunhistochemie von Larven, Puppen und Erwachsenenbildung<em&gt; Drosophila</em&gt; Netzhäute

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