Name: an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00
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Diese Arbeit wurde durch die NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), der NIH CA016520 / TAPITMAT (NS), die private Finanzierung durch die Claneil Foundation (NS), und die Eierstöcke SPORE zu gewähren FCCC und der University of Pennsylvania unterstützt ( P50 CA83638) und der Fox Chase Cancer Center-Core Grant (P30 CA06927) (DCC). Die Autoren bedanken sich die hervorragende technische Unterstützung der Optical / Biolumineszenz Core Facility von Dr. EJ Delikatny an der University of Pennsylvania, Anthony Secreto vom Stem Cell und Xenograft-Core von Dr. G. Danet-Desnoyers an der University of Pennsylvania Cancer gerichteten Center for Training SNC orthotopen Injektionstechnik und Denada Dangaj an der University of Pennsylvania / OCRC für die Unterstützung der Operation.

1. Cell Culture <ol><li> Vor orthotoper Injektion, Kultur MOV1 Kat-Zellen, aus DR26 Tumoren stammen, in einem T175 Flasche, bis sie 90% konfluent. Planen Sie 1 bis 5.000.000 Zellen pro Injektion, die 1 oder 2 T175 Flaschen erfordern verwenden. </li><li> Am Tag der Injektion Ernte der Zellen und Bestimmung der Zellzahl mit einer Zählkammer. </li><li> Sobald die Zellkonzentration bestimmt worden ist, Pellet die Zellen durch Zentrifugation für 5 Minuten bei 300 X g bei Raumtemperatur. </li><li> Nach dem Spin...

<ol>
	<li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+early+detection.">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li><li>Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+CA125:+the+coming+of+age+of+ovarian+cancer+biomarkers.+Are+we+there+yet.">Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet.</a> Future Medicine. 3, 275-288 (2009).</li><li>Anderson, G. 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Chirurgie und orthotopen Injektionen Orthotoper Injektion in Eierstock Bursa Anforderungen Ausbildung und Präzision. So <ol><li> Im Falle einer schlechten chirurgischen Erfahrung, Praxis mit Leichen zuerst. </li><li> Verwenden Sie bevorzugt multipare Frauen (ein oder zwei Würfe), da sie größere Eierstöcke im Laufe der Zeit die Injektion und die Überlebenszeit ermöglicht mit nulliparen Frauen vergleichen zu entwickeln. </li><li> Aufgrund der geringen Größe der Maus Eierstock Bursa,...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM-GLUTAMAX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10564-011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>14040</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Versene</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>17-711E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Deltaphase</td>
<td>39 DP</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dynarex</td>
<td>1108</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>06-669-62</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Artificial tears ointment </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>17845-153</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketoprofen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fort Dodge laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3cc/insulin syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>309301</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Syneture</td>
<td>9612-31</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue adhesive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vetbond</td>
<td>3M</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vet Bactrim/ oral suspension</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hi-tech Pharmacal</td>
<td>840823</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IVIS-Lumina</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Caliper lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isofluorane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Phoenix Pharma., Inc.</td>
<td>J108013</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum, Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437036</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TurboFP635 mammalian vector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Evrogen</td>
<td>FP721</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T175 flasks</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>cellstar</td>
<td>660-190</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

an orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses

Hintergrund: Das Ovarialkarzinom ist in der Regel in einem fortgeschrittenen Stadium, wo der Fall / Todesfall Verhältnis hoch diagnostiziert und bleibt somit die tödlichste aller gynäkologischen Malignomen unter US-Frauen 1,2,3. Serösen Tumoren sind die häufigsten Formen von Eierstockkrebs und 4,5 der Tg-MISIIR-Tag transgenen stellt die einzige Maus-Modell, das sich spontan entwickelt diese Art von Tumoren. Tg-MISIIR-Tag Mäuse exprimieren SV40 transformiert Region unter die Kontrolle des Müllerschen Hemmstoff Typ-II-Rezeptor (MISIIR)-Gen-Promotor 6. Zusätzliche transgenen Linien wurden die Ausdruck der SV40 TAg Transgen identifiziert, aber nicht entwickeln Ovarialtumoren. Non-Tumor anfällig Mäuse zeigen typische Lebensdauer für C57Bl / 6 Mäusen und sind fruchtbar. Diese Mäuse können als syngenen Transplantat-Empfänger für Tumorzellen von Tg-MISIIR-Tag-DR26-Mäusen isoliert eingesetzt werden. Ziel: Obwohl Tumorimaging ist möglich, 7, Früherkennung von Tumoren tief in kleinen lebenden Tieren schwierig. Um präklinischen Studien in einer immunologisch intakten Tiermodell für seröse Ovarialkarzinom beschreiben wir eine syngenen Mausmodell für diese Art von Eierstock-Krebs, der in-vivo-Bildgebung, Studien über die Tumor-Mikroumgebung des Tumors Immunantwort ermöglicht. Methoden: Wir erste abgeleitete einem TAG + Maus-Zelllinie (MOV1) aus einem spontanen Ovarialtumor in einem 26 Wochen alten DR26 Tg-MISIIR-Tag weiblichen geerntet. Dann haben wir stabil transduzierten MOV1 Zellen mit TurboFP635 Lentivirus Säugetieren Vektor, Katuschka kodiert, eine weit-rot-Mutante der rot fluoreszierendes Protein aus Seeanemone Entacmaea quadricolor mit Anregung / Emissionsmaxima bei 588/635 nm 8,9,10. Wir orthotop implantiert MOV1 Kat in den Eierstöcken 11,12,13,14 von Nicht-Tumor anfällig Tg-MISIIR-Tag weiblichen Mäusen. Tumorprogression wurde in vivo optische Bildgebung und Tumor-Mikroumgebung wurde mittels Immunhistochemie analysiert gefolgt. Ergebnisse: orthotop implantiert MOV1 Kat-Zellen entwickelt serösen Ovarialtumoren. MOV1 Kat Tumoren konnten visualisiert werden in-vivo-Bildgebung bis zu drei Wochen nach der Implantation (Abb. 1) und wurden mit Leukozyten infiltriert, wie in menschlichen Eierstockkrebs 15 (Abb. 2) beobachtet. Schlussfolgerungen: Wir beschreiben einen orthotopen Modell des Ovarialkarzinoms geeignet für in-vivo-Bildgebung des frühen Tumoren aufgrund des hohen pH-Stabilität und Photostabilität Katuschka in tiefen Gewebeschichten. Wir schlagen vor, den Einsatz dieser neuartigen syngenen Modell seröser Eierstockkrebs für die in vivo Bildgebung und Überwachung der Tumor Immunantwort und Immuntherapien.

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An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Zur Untersuchung<em&gt; In vivo</em&gt; Tumorwachstum und Tumor-Mikroumgebung, verwendeten wir eine syngenen und orthotopen Mausmodell des Ovarialkarzinoms in immunkompetenten Tieren. Wir transduzierten Maus Tumor-Zelllinie (MOV1) mit Katuschka fluoreszierende Protein (MOV1<sup&gt; KAT</sup&gt;) Und hier zeigen wir seine orthotopen Implantation in Ovar und<em&gt; In vivo</em&gt; Bildgebung.

Einem orthotopen Modell des seröse Ovarialkarzinom in immunkompetenten Mäusen für In vivo Tumor Imaging und Überwachung der Tumor Immunantworten

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Murine Model of CD40-activation of B cells

Mausmodell der CD40-Aktivierung von B-Zellen

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Forschung

Immunologie und Infektion

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Modell zur Messung der Immunantwort auf Malaria im Kontext der HIV-Koinfektion

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Ein IL-8 transientes transgenisiertes Mausmodell für die<em&gt; In vivo</em&gt; Langzeitüberwachung von entzündlichen Reaktionen

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolierung von Salmonella Typhimurium-mit Phagosom von Makrophagen

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Schneider In Vivo Cytotoxicity Assays zur Untersuchung von Immunodominanz in modularspezifischen CD8+ T Cell-Reaktionen

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Implantation und Überwachung eines orthotopischen Modells des menschlichen Pleuralmesothelioms bei athymischen Mäusen durch PET/CT

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...

Visualization, Quantification, and Mapping of Immune Cell Populations in the Tumor Microenvironment

Visualisierung, Quantifizierung und Kartierung von Immunzellpopulationen in der Tumormikroumgebung

The immune landscape of the tumor microenvironment (TME) is a determining factor in cancer progression and response to therapy. Specifically, the density ...

Precise Brain Mapping to Perform Repetitive In Vivo Imaging of Neuro-Immune Dynamics in Mice

Präzise Gehirnkartierung zur Durchführung von Repetitiven In-Vivo-Bildgebungen der Neuro-Immun-Dynamik bei Mäusen

The central nervous system (CNS) is regulated by a complex interplay of neuronal, glial, stromal, and vascular cells that facilitate its proper function. ...

Microfluidic Co-Culture Models for Dissecting the Immune Response in in vitro Tumor Microenvironments

Mikrofluidische Co-Kulturmodelle zur Analyse der Immunantwort in in vitro Tumormikroumgebungen

Complex disease models demand cutting-edge tools able to deliver physiologically and pathologically relevant, actionable insights, and unveil otherwise ...

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice

Rezidivierende Escherichia coli Harnwegsinfektion, ausgelöst durch Gardnerella vaginalis Blasenexposition bei Mäusen

Recurrent urinary tract infections (rUTI) caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are common and costly. Previous articles describing models of ...