Name: intracranial orthotopic allografting of medulloblastoma cells in immunocompromised mice
Uploaded: 2010-10-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Orthotopic Allografting of Medulloblastoma Cells in Immunocompromised Mice at JoVE.com

Dit onderzoek werd ondersteund door subsidies van de Vanderbilt-Ingram Cancer Center Support Grant (P30 CA068485), de Childhood Brain Tumor Foundation en het National Institutes of Health (NS042205).

1. Micro-dissectie van tumor-dragende kleine hersenen en dissociatie van tumorweefsel <ol><li> Ophalen van tumorweefsel <ol><li> Zieke muizen met medulloblastoom zijn vaak runted, en weer te geven hydrocefalie en typische neurologische symptomen, waaronder posterior verlamming en gebrek aan houding terug te krijgen wanneer deze is gekanteld. Te halen tumorweefsel, euthanaseren muizen door kooldioxide inademing. Het is imporant niet uit te voeren cervicale dislocatie, een procedure die druk genereert o...

<ol>
	<li>Schuller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+granule+neuron+precursor+identity+is+a+critical+determinant+of+progenitor+cell+competence+to+form+Shh-induced+medulloblastoma.">Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma.</a> Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).</li><li>Yang, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medulloblastoma+can+be+initiated+by+deletion+of+Patched+in+lineage-restricted+progenitors+or+stem+cells.">Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells.</a> Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).</li><li>Kessler, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-myc+alters+the+fate+of+preneoplastic+cells+in+a+mouse+model+of+medulloblastoma.">N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma.</a> Genes Dev. 23, 157-170 (2009).</li><li>Flora, A., Klisch, T. J., Schuster, G., Zoghbi, H. Y., Y, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+Atoh1+disrupts+Sonic+Hedgehog+signaling+in+the+developing+cerebellum+and+prevents+medulloblastoma.">Deletion of Atoh1 disrupts Sonic Hedgehog signaling in the developing cerebellum and prevents medulloblastoma.</a> Science. 326, 1424-1427 (2009).</li><li>Salsano, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+neurogenic+basic+helix-loop-helix+transcription+factor+NEUROG1+identifies+a+subgroup+of+medulloblastomas+not+expressing+ATOH1.">Expression of the neurogenic basic helix-loop-helix transcription factor NEUROG1 identifies a subgroup of medulloblastomas not expressing ATOH1.</a> Neuro Oncol. 9, 298-307 (2007).</li></ol>

Een aantal kritische factoren voor een succesvolle medulloblastoom cel allografting dat de rendementen secundaire tumoren ontstaan ​​zijn als volgt te waarborgen: Gebruik eerst slechts 50% Accutase voor weefsel dissociatie en niet over-verteren het weefsel als langdurige enzym behandeling leidt tot een significante vermindering van de levensvatbaarheid van de cellen. Ook gebruik alleen de 1 mL grootte Pipetman als kleinere tips kan genereren ook fysieke schade aan de gedissocieerde cellen. Het is fijn om een ​​m...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Neurobasal medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21103049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hEGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>PHG0311</td>
<td>25ng/ml</td>
</tr>
<tr>
<td>bFGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>PHG0023</td>
<td>25ng/ml</td>
</tr>
<tr>
<td>N2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17502048</td>
<td>1X</td>
</tr>
<tr>
<td>B27(-RA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>12587010</td>
<td>1X</td>
</tr>
<tr>
<td>Accutase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A1110501</td>
<td>50% </td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25030081</td>
<td>2mM</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereotaxic instrument</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting </td>
<td>51730</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Foredom flexible shaft drill, hang-up style</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting </td>
<td>58650</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Large probe holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting </td>
<td>51633</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 &mu;L syringe, 26 ga., bevel tip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting </td>
<td>51105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Drill bit .75mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stoelting</td>
<td>51455-3</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

intracranial orthotopic allografting of medulloblastoma cells in immunocompromised mice

Medulloblastoom is de meest voorkomende pediatrische tumor van het zenuwstelsel. Een groot deel van onderzoek bij dieren is gericht op het cerebellum granule neuron precursors (CGNPs) als de cel-van-oorsprong voor medulloblastoom 1-4. Echter, de diverse klinische presentaties van medulloblastoom subtypes in menselijke patiënten (nodulair, desmoplastic, klassieke en grote cel / anaplastisch), en het feit dat medulloblastoom is gevonden in een subgroep van de menselijke patiënten zonder ectopische expressie van CGNP marker 5, suggereren dat de cellulaire en moleculaire oorsprong van het medulloblastoom zijn meer complex en lang niet volledig ontcijferd. Daarom is het essentieel om te bepalen of er een alternatief is medulloblastoom tumorcel-van-oorsprong op basis van welke cel-type specifieke therapeutische modaliteit kunnen worden ontwikkeld. Te dien einde zal intracraniële orthotopische allografting van genetisch gemarkeerde tumorcellen soorten, gevolgd door latere analyses van secundaire ontwikkeling van tumoren in de ontvangers laten bepalen van de cellulaire oorsprong van tumor-initiëren cellen. Hier beschrijven we de experimentele protocol voor intracraniële orthotope allografting van medulloblastoom cellen afkomstig van de primaire tumor weefsel, en deze procedure kan ook worden gebruikt voor het transplanteren van cellen van gevestigde cellijnen.

Watch this Scientific Journal Video about Intracranial Orthotopic Allografting of Medulloblastoma Cells in Immunocompromised Mice at JoVE.com

Intracranial Orthotopic Allografting of Medulloblastoma Cells in Immunocompromised Mice

Dit protocol beschrijft de isolatie en dissociatie van de muis medulloblastoom weefsel, en de daaropvolgende allografting van de tumorcellen in immuungecompromitteerde ontvangende muizen in om secundaire medulloblastoom te starten.

Intracraniële orthotope Allografting van Medulloblastoom cellen in Immunogecompromitteerde Muizen

Medulloblastoma is the most common pediatric tumor of the nervous system. A large body of animal studies has focused on cerebellar granule neuron ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation, Enrichment, and Maintenance of Medulloblastoma Stem Cells

Isolatie, Verrijking, en onderhoud van Medulloblastoom Stem Cells

Brain tumors have been suggested to possess a small population of stem cells that are the root cause of tumorigenesis. Neurosphere assays have been ...

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

Intracraniële Injectie van adeno-geassocieerde virale vectoren

Intracranial injection of viral vectors engineered to express a fluorescent protein is a versatile labeling technique for visualization of specific ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfectie van Mouse retinale ganglioncellen door In vivo Elektroporatie

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging van zintuig voorloper cellen in Intact Drosophila Poppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Een eenvoudige en goedkope methode voor het bepalen Koude Gevoeligheid en aanpassing in Muizen

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Intracranial Pharmacotherapy and Pain Assays in Rodents

Intracraniële farmacotherapie en pijn Assays bij knaagdieren

Pain is a salient sensory experience with affective and cognitive dimensions. However, central mechanisms for pain remain poorly understood, hindering the ...

The Detection of 5-Hydroxymethylcytosine in Neural Stem Cells and Brains of Mice

De detectie van 5-Hydroxymethylcytosine in neurale stamcellen en hersenen van muizen

Multiple&#160;DNA modifications have been identified in the mammalian genome. Of that, 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine-mediated epigenetic ...

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Kwantitatieve meting van Intrathecaal gesynthetiseerde eiwitten bij muizen

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Electrocorticographic Recording of Cerebral Cortex Areas Manipulated Using an Adeno-Associated Virus Targeting Cofilin in Mice

Elektrocorticografische opname van hersenschorsgebieden gemanipuleerd met behulp van een Adeno-geassocieerd virus gericht op cofilin bij muizen

The use of electrocorticographic (ECoG) recordings in rodents is relevant to sleep research and to the study of a wide range of neurological conditions. ...

A Scalable Model to Study the Effects of Blunt-Force Injury in Adult Zebrafish

Een schaalbaar model om de effecten van blunt-force letsel bij volwassen zebravissen te bestuderen

Blunt-force traumatic brain injuries (TBI) are the most common form of head trauma, which spans a range of severities and results in complex and ...