Name: immunofluorescent detection of two thymidine analogues (cldu and idu) in primary tissue
Uploaded: 2010-12-07T16:35:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues CldU and IdU in Primary Tissue at JoVE.com

Поддержка JDRF, NIH (R01-DK081469), штата Пенсильвания (Центр передовых технологий в регенеративной медицине грант 4100043362), март Dimes (Василий О&#39;Коннор Starter научный сотрудник Award), и Университета Пенсильвании пилотных DERC и технико-экономическое гранта (DK19525).

<ol>
	<li>Teta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+regeneration+of+adult+Beta+cells+does+not+involve+specialized+progenitors.">Growth and regeneration of adult Beta cells does not involve specialized progenitors.</a> Dev Cell. 12 (5), 817-817 (2007).</li><li>Kiel, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haematopoietic+stem+cells+do+not+asymmetrically+segregate+chromosomes+or+retain+BrdU.">Haematopoietic stem cells do not asymmetrically segregate chromosomes or retain BrdU.</a> Nature. 449 (7159), 238-238 (2007).</li><li>Bersell, K., Arab, S., Haring, B., Kuhn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuregulin1/ErbB4+signaling+induces+cardiomyocyte+proliferation+and+repair+of+heart+injury.">Neuregulin1/ErbB4 signaling induces cardiomyocyte proliferation and repair of heart injury.</a> Cell. 138, 257-257 (2009).</li><li>Rankin, M. M., Kushner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+Beta+Cell+Proliferation+Is+Severely+Restricted+with+Advanced+Age.">Adaptive Beta Cell Proliferation Is Severely Restricted with Advanced Age.</a> Diabetes. , (2009).</li><li>He, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclin+D2+Protein+Stability+Is+Regulated+in+Pancreatic+Beta+Cells.">Cyclin D2 Protein Stability Is Regulated in Pancreatic Beta Cells.</a> Mol Endocrinol. , (2009).</li><li>Kushner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-cell+growth:+an+unusual+paradigm+of+organogenesis+that+is+cyclin+D2/Cdk4+dependent.">Beta-cell growth: an unusual paradigm of organogenesis that is cyclin D2/Cdk4 dependent.</a> Cell Cycle. 5 (3), 234-234 (2006).</li><li>Teta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+slow+turnover+of+beta-cells+in+aged+adult+mice.">Very slow turnover of beta-cells in aged adult mice.</a> Diabetes. 54 (9), 2557-2557 (2005).</li><li>Wilson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cells+reversibly+switch+from+dormancy+to+self-renewal+during+homeostasis+and+repair.">Hematopoietic stem cells reversibly switch from dormancy to self-renewal during homeostasis and repair.</a> Cell. 135 (6), 1118-1118 (2008).</li><li>Van Nest, G., Raman, R. K., Rutter, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+dexamethasone+and+5-bromodeoxyuridine+on+protein+synthesis+and+secretion+during+in+vitro+pancreatic+development.">Effects of dexamethasone and 5-bromodeoxyuridine on protein synthesis and secretion during in vitro pancreatic development.</a> Dev Biol. 98 (2), 295-295 (1983).</li><li>Githens, S., Pictet, R., Phelps, P., Rutter, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-bromodeoxyuridine+may+alter+the+differentiative+program+of+the+embryonic+pancreas.">5-bromodeoxyuridine may alter the differentiative program of the embryonic pancreas.</a> J Cell Biol. 71 (2), 341-341 (1976).</li><li>Walther, B. T., Pictet, R. L., David, J. D., Rutter, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+mechanism+of+5-bromodeoxyuridine+inhibition+of+exocrine+pancreas+differentiation.">On the mechanism of 5-bromodeoxyuridine inhibition of exocrine pancreas differentiation.</a> J Cell Biol. 249 (6), 1953-1953 (1974).</li><li>Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+pancreatic+islet+cell+proliferation+by+heavy+water+labeling.">Measurement of pancreatic islet cell proliferation by heavy water labeling.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 293 (5), E1459-E1459 (2007).</li><li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo.">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (7), 2415-2415 (2008).</li><li>Best, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Click+chemistry+and+bioorthogonal+reactions:+unprecedented+selectivity+in+the+labeling+of+biological+molecules.">Click chemistry and bioorthogonal reactions: unprecedented selectivity in the labeling of biological molecules.</a> Biochemistry. 48 (28), 6571-6571 (2009).</li><li>Buck, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+S-phase+cell+cycle+progression+using+5-ethynyl-2'-deoxyuridine+incorporation+with+click+chemistry,+an+alternative+to+using+5-bromo-2'-deoxyuridine+antibodies.">Detection of S-phase cell cycle progression using 5-ethynyl-2'-deoxyuridine incorporation with click chemistry, an alternative to using 5-bromo-2'-deoxyuridine antibodies.</a> Biotechniques. 44 (7), 927-927 (2008).</li><li>Huising, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRFR1+is+expressed+on+pancreatic+beta+cells,+promotes+beta+cell+proliferation,+and+potentiates+insulin+secretion+in+a+glucose-dependent+manner.">CRFR1 is expressed on pancreatic beta cells, promotes beta cell proliferation, and potentiates insulin secretion in a glucose-dependent manner.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (2), 912-912 (2008).</li><li>Reimann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+sensing+in+L+cells:+a+primary+cell+study.">Glucose sensing in L cells: a primary cell study.</a> Cell Metab. 8 (6), 532-532 (2008).</li><li>Doupe, D. P., Klein, A. M., Simons, B. D., Jones, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ordered+architecture+of+murine+ear+epidermis+is+maintained+by+progenitor+cells+with+random+fate.">The ordered architecture of murine ear epidermis is maintained by progenitor cells with random fate.</a> Dev Cell. 18 (2), 317-317 (2010).</li></ol>

Все эксперименты с мышами проводились в животном объекте в Детской больницы Филадельфии в соответствии с руководящими принципами институциональной уходу и использованию животных комитета (IACUC).

Наш подход к тимидина подход к маркировке обновления клеток имеет много потенциальных применений в области биомедицинских исследований. На сегодняшний день мы сосредоточены на поджелудочную железу, но мы так же применили эту стратегию для изучения обновления клеток кожи, кишечника, печени, надпочечников, почек, семенников, яичников, щитовидной железы, лимфатических узлов, кроветворения, и головной мозг 1. Потому что клетка оборота варьируется от ткани к ткани, маркировка стратегии должны быть настроены, чтобы получить наиболее убедительную информацию от органов, представляющих интерес. Моррисон и его коллеги использовали CldU и ПИН в течение 1 дня каждый маркировать кроветворения 2. Кун и коллеги используют CldU и ПИН в течение 4 дней каждый обнаружить деления клеток в миокард регенерирующим 3. В отличие от этого, мы использовали CldU и ПИН на срок до 9 месяцев общий для обозначения базально обновления клеток в панкреатических островков, ткани с минимальным оборотом клетки как животное возрасте 1,4-6. Наиболее очевидный потенциал применения наших маркировки стратегия проведения исследований, чтобы определить обновления клеток в тканях гомеостаза. Но наша методика имеет и ряд других потенциальных применений. Например, мы недавно применил этот метод для определения онкогенных преобразования в тканях, где основными областями повышенной репликации можно легко определить по увеличились включение CldU или ПИН 5. Моррисон и его коллеги использовали CldU и ПИН в течение 1 дня каждый, чтобы проверить на этикетке сохраняя поведение кроветворных стволовых клеток 2. Мы также применяется последовательная маркировка аналогом тимидина, чтобы определить транзит-усилительных клетки способствуют росту и обновлению тканей 1. В этом приложении последовательное введение аналогов тимидина представляет собой новый подход для изучения происхождения и выживания клеток, участвующих в тканевого гомеостаза. Тимидина аналогов не должна быть использована без осторожности. Синтетические аналоги тимидина имеют потенциал токсичности для деления клеток, и их использование теоретически может нарушать обновления клеток у растущих животных. Тимидина аналогов были использованы в качестве агентов radiosensitizing для больных раком, и может замедлить обновления клеток. Таким образом, мы призываем следователей осторожно исследовать потенциальные токсические эффекты в тканях, представляющих интерес. Например, Trumpp и его коллеги обнаружили, что системные BrdU может заставить гемопоэтических стволовых клеток ввести клеточного цикла 7. Например, Раттер и его коллеги отметили, что высокие дозы аналогов тимидина являются токсичными для развивающихся поджелудочной железы 8. Совсем недавно Hellerstein и его коллеги из KineMed, Inc обнаружили, что BrdU администрации замедляет внутри островка распространения на 16-25% с помощью собственной тяжелой техникой маркировке воды 9. Вся подготовка островок используется Hellerstein и коллег содержится много других эндокринных и не эндокринных типов клеток, которые могут составлять целых 50% от общей подготовки островок. Тем не менее, мы находим, что длительная инфузия BrdU не влияет на бета-клеточной пролиферации у молодых взрослых мышей, если судить по выражению Ki67 4. Кроме того, долгосрочные администрации CldU и ПИН-видимому, не ухудшать бета расширения клеточной массы 1. Кроме того, бета ставки пролиферации клеток эквивалентны между мышами помечены BrdU в течение длительных периодов времени и мышей, которые только маркировку, указывающую на несколько часов (ставки приведены к эквивалентной периоды времени). Вместе взятые, эти результаты позволяют предположить, что мыши, можно смело переносить долгосрочных низких доз администрации тимидина аналогов. Тем не менее, мы не можем исключить потенциальную токсичность тимидина аналогов в рост клеток поджелудочной железы бета-тестирования. В результате, мы продолжаем выполнять элементы управления при маркировке мышей с аналогами тимидина, и призываем другие исследователи, чтобы сделать то же самое. Наша методика последовательной маркировки аналог тимидина не без ошибок и технических проблем. В результате, контроль слайды особенно важны. Мы сформировали контроль слайды, которые состоят из различных тканей с 1) Мыши, которые были только маркированы CldU;.. 2) Мыши, которые были только помечены с потребителями инъекционных наркотиков;. 3) Мыши, которые были последовательно помечены CldU а затем ПИН;. 4) Мыши, которые были помечены последовательно в обратном порядке, сначала с ПИН, а затем CldU;. 5) Мыши, которые макет помечены только воду. При обучении на этикетке с CldU и ПИН, следователи должны всегда выполнять весь протокол со всеми 5 выше набора слайдов из тканей, представляющих интерес. Незначительные перекрестной реактивности между CldU и ПИН печально, но неизбежным недостатком маркировки с обоими тимидина аналогов. CldU и ПИН методика основана на различиях в сродство между антисыворотки, которые первоначально были производным от BrdU у разных видов (мыши и крысы). Наш протокол, в то время как громоздкие, предназначена для сведения к минимуму такой перекрестной реактивности. Следовательно, призывают к осторожности среди исследователей, которые считают, пропуская шаг (ы) протокол. В частности, мы имеемстолкнулись с проблемами со средним антисыворотки, которые крест реактивной между мыши и крысы. Это может быть сведен к минимуму за счет использования сыворотки Джексон, который полностью кросс-адсорбированная между мыши и крысы. Иногда мы не в состоянии адекватно обнаружить тимидина. В таких случаях крайне важно использовать слайды контроль чтобы определить, какой реагент или шаг не работала. Трудности, как правило, из-за плохой аликвоты сыворотки, сухие слайды, или неадекватного ядерной пермеабилизации. Мы не смогли успешно этикетку развивающихся эмбрионов с потребителями инъекционных наркотиков. Таким образом, не все ткани могут быть проницаемы для ПИН. Альтернативы CldU и ПИН для двойной маркировки аналога тимидина на горизонте. Эду (5-этинил-2 дезоксиуридина) может быть субстратом для меди катализируемой нажмите химии обнаружения 10,11. Методы обнаружения EDU не требуют разделения цепей ДНК, и, таким образом, очень поддаются анализу с помощью проточной цитометрии 12. EDU совместимо, но не пересекают реакцию с BrdU 10. EDU была использована для количественного обновления клеток различных тканей мыши в том числе бета-клеток поджелудочной железы 13, кишечных клеток L 14 и Эпидермис 15. EDU является довольно дорогим на данный момент ($ 1000 США за 500 мг). Тем не менее, Эду обнаружения представляется гораздо более чувствительны, чем BrdU обнаружения 10. Таким образом, это может быть экономически целесообразным объединить EDU и BrdU вместо CldU и ПИН. Этот метод может также позволить обнаружение трех раундов деления клеток у мышей трижды, предназначенного для EDU, CldU и ПИН. Таким образом, наша методика последовательной маркировки аналог тимидина является новый подход к выявлению обновления клеток. Мы надеемся, что наш подход позволяет другим ученым для более точного количественного клеточного деления, и ожидать, что оно откроет новые парадигмы в тканевого гомеостаза.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>5-chloro-2-deoxyuridine (CldU)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedical</td>
<td>0210547891</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-Iodo-2-deoxyuridine (IdU)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedical</td>
<td>0210035701</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4% Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>USB</td>
<td>19943</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10% Buffered Formalin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>23-427-098</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>XYLENES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>EM-XX0060-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol, Anhydrous (Histological)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>A405P-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS, 10X Powder Concentrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP665-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton &#x2013;X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP151-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hydrochloric Acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>BDH3028-2.5LG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Normal Donkey Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoResearch</td>
<td>017-000-121</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouse Anti BrdU</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Pharmingen</td>
<td>347580</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rat mab anti BrdU</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Accurate Chemical</td>
<td>OBT0030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy2 donkey anti-rat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>712-225-153</td>
<td>Fully adsorbed secondaries from Jackson (minimal cross reactivity).</td>
</tr>
<tr>
<td>Cy5 donkey anti-mouse</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson immuno</td>
<td>715-175-151</td>
<td>See above</td>
</tr>
<tr>
<td>Glass Cover Slips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>C9056-1CS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>YFP Filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chroma</td>
<td>49003 ET EYFP</td>
<td>Reduces auto-fluorescence in Cy2 channel</td>
</tr>
<tr>
<td>Cy3 Filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chroma</td>
<td>49004 ET Cy3</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cy5 Filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chroma</td>
<td>49006 ET Cy5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ORCA ER Microscope Camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamamatsu</td>
<td>C4742-95-12ER</td>
<td>Excellent detection of fluorophores</td>
</tr>
<tr>
<td>ProLong Gold antifade reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P36930</td>
<td>Do not use Vectashield (toxic to cyanine dyes).</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

immunofluorescent detection of two thymidine analogues (cldu and idu) in primary tissue

Точное измерение деления клеток является фундаментальной проблемой в экспериментальной биологии, которая становится все более сложной, когда медленно делящиеся клетки, анализируются. Основанная методов обнаружения деления клеток включает прямой визуализации непрерывным микроскопии в клеточной культуре, размывание витальных красителей, таких как карбоксифлуоресцеина ди-aetate сукцинимидил эфира (CFSE), иммуно-обнаружение митогенных антигены, такие как Ki67 или PCNA, и тимидина аналогов. Тимидина аналоги можно обнаружить с помощью различных методов, включая радио-детектирования тритием тимидина, иммуно-обнаружения бром-дезоксиуридина (BrdU), хлор-дезоксиуридина (CldU) и йод-дезоксиуридина (ПИН) и химического обнаружения этинил-дезоксиуридина (EDU). Мы вывели стратегии для обнаружения последовательного включения различных аналогов тимидина (CldU и ПИН) в тканях взрослых мышей. Наш метод позволяет исследователям точно количественно двух последовательных раундов деления клеток. Благодаря оптимизации иммуноокрашивания протоколов наш подход может обнаружить очень низкие дозы тимидина аналогов вводят через питьевую воду, безопасную для управления мышам в течение длительных периодов времени. Следовательно, наш метод может быть использован для обнаружения обновления клеток в очень долгоживущих тканей. Оптимальное immunofluoresent результаты окрашивания могут быть достигнуты в нескольких типов тканей, в том числе поджелудочной железы, кожи, кишечника, печени, надпочечников, семенников, яичников, щитовидной железы, лимфатических узлов и мозга. Мы также применили этот метод для определения онкогенных преобразования в тканях. У нас есть дальнейшие применил эту технику, чтобы определить транзит-усилительных клетки способствуют росту и обновлению тканей. В этом смысле, последовательное введение аналогов тимидина представляет собой новый подход для изучения происхождения и выживания клеток, участвующих в тканевого гомеостаза.

Watch this Scientific Journal Video about Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues CldU and IdU in Primary Tissue at JoVE.com

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues CldU and IdU in Primary Tissue

Мы вывели стратегии для обнаружения последовательного включения тимидина аналогов (CldU и ПИН) в тканях взрослых мышей количественно двух последовательных раундов деления клеток. Эта стратегия полезна для обнаружения обновления клеток долгоживущих тканей, онкогенных трансформации, или транзит-усилительных элементов.

Иммунофлуоресцентного Обнаружение два аналога тимидина (CldU и ПИН) в первичных тканей

Accurate measurement of cell division is a fundamental challenge in experimental biology that becomes increasingly complex when slowly dividing cells are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunofluorescent Detection of Two Thymidine Analogues (CldU and IdU) in Primary Tissue

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Первичные культуры и плазмиды электропорации мышей органа Корти.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Выделение и первичной культуре клеток крысы Печеночная

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Выделение первичных Миофибробласты из мышиных и человеческих ткань толстой кишки

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Improved Swiss-rolling Technique for Intestinal Tissue Preparation for Immunohistochemical and Immunofluorescent Analyses

Улучшенная техника швейцарско-прокатка для Кишечные Подготовка ткани для иммуногистохимического и иммунофлуоресцентного анализов

Understanding the role of factors that regulate intestinal epithelial homeostasis and response to injury and regeneration is important. The current ...

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

In Situ Иммунофлуоресцентное окрашивание аутофагии в мышечных клетках

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal ...

Tissue Collection of Bats for -Omics Analyses and Primary Cell Culture

Ткань Коллекция летучих мышей для -Омики анализ и первичной культуры клеток

As high-throughput sequencing technologies advance, standardized methods for high quality tissue acquisition and preservation allow for the extension of ...

Microbiota Analysis Using Two-step PCR and Next-generation 16S rRNA Gene Sequencing

Анализ микробиоты с использованием двухступенчатого ПЦР и секвенирования гена нового поколения 16S rRNA

The human gut is colonized by trillions of bacteria that support physiologic functions such as food metabolism, energy harvesting, and regulation of the ...

Apoptosis Induction and Detection in a Primary Culture of Sea Cucumber Intestinal Cells

Апоптоз индукции и обнаружения в начальной культуре морских огурцов кишечных клеток

Primary cultured cells are used in a variety of scientific disciplines as exceptionally important tools for the functional evaluation of biological ...

Simple Detection of Primary Cilia by Immunofluorescence

Простое обнаружение первичной силии с помощью иммунофлуоресценции

Primary cilia are dynamically regulated during cell cycle progression, specifically during the G0/G1 phases of the cell cycle, being resorbed prior to ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

Рабочий процесс количественной протеомики с использованием множественного мониторинга реакций на основе обнаружения белков из ткани мозга человека

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...