Name: the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system
Uploaded: 2010-08-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

אנו מודים למר האג&#39;ימה Ichijo עצות עבור וידאו הקלטה מועיל עבור עריכת וידאו. כמו כן, אנו מודים Drs.Yuji Tsunekawa ו Kaichi Yoshizaki עבור עוזר סוג הקלטה וידאו. עבודה זו נתמכת על ידי KAKENHI על B המדען הצעיר על תחומי המדע, מולקולרית המוח עדיפות מ MEXT של יפן. אנו מכירים את התמיכה של גלובל COE תוכנית &quot;יסוד Translational המרכז לחקר מדעי המוח גלובל&quot; מ MEXT של יפן המחקר Core למדע וטכנולוגיה Evolutional ו (CREST) ​​מתוך מדעי החברה היפנית למדע וטכנולוגיה של היפנים הסוכנות וטכנולוגיה (JST) .

1. הגדרת מערכת WEC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשותף קרום 0.22 מיקרומטר מסנן צינור סיליקון מפרצון בתוך מערכת WEC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את השסתום של גליל גז המכיל O 2 (95%) ו - CO 2 (5%). תזרים את תערובת גז לתוך התוף דרך בקבוק המכיל מ...

<ol>
	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoroduction.+In+mammalian+postimplantation+embryos.">Intoroduction. In mammalian postimplantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Cockroft, D. L., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+culture+of+post+implantation+embryos.">Dissection and culture of post implantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 15-40 (1990).</li><li>Morris-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mammalian+embryos.">Postimplantation mammalian embryos.</a> Essential Developmental Biology A Practical Approach. , 55-66 (1993).</li><li>Fujinaga, M., Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+rodent+embryos+during+the+early+postimplantation+period.">In vitro culture of rodent embryos during the early postimplantation period.</a> Developmental Biology Protocols. , 53-76 (2000).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase.">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li><li>Osumi-Yamashita, N., Ninomiya, Y., Eto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+craniofacial+embryology+in+vitro.">Mammalian craniofacial embryology in vitro.</a> Int. J. Dev. Biol. 41, 187-194 (1997).</li><li>Inoue, T., Nakamura, S., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+of+the+mouse+prosencephalic+neural+plate.">Fate mapping of the mouse prosencephalic neural plate.</a> Dev. Biol. 219, 373-383 (2000).</li><li>Nomura, T., Holmberg, J., Frisen, J., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6-dependent+boundary+defines+alignment+of+migrating+olfactory+cortex+neurons+via+the+repulsive+activity+of+ephrin+A5.">Pax6-dependent boundary defines alignment of migrating olfactory cortex neurons via the repulsive activity of ephrin A5.</a> Development. 133, 1335-1345 (2006).</li><li>Inoue, Y. U., Asami, J., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+of+mouse+rhombomeres+by+Cadherin-6::EGFP-BAC+transgenesis+underscores+the+role+of+cadherins+in+hindbrain+compartmentalization.">Genetic labeling of mouse rhombomeres by Cadherin-6::EGFP-BAC transgenesis underscores the role of cadherins in hindbrain compartmentalization.</a> Neurosci. Res. 63, 2-9 (2009).</li><li>Calegari, F., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibition+of+cyclin-dependent+kinases+that+lengthens,+but+does+not+arrest,+neuroepithelial+cell+cycle+induces+premature+neurogenesis.">An inhibition of cyclin-dependent kinases that lengthens, but does not arrest, neuroepithelial cell cycle induces premature neurogenesis.</a> J. Cell Sci. 116, 4947-4955 (2003).</li><li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li><li>Arai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fabp7,+a+downstream+gene+of+Pax6,+in+the+maintenance+of+neuroepithelial+cells+during+early+embryonic+development+of+the+rat+cortex.">Role of Fabp7, a downstream gene of Pax6, in the maintenance of neuroepithelial cells during early embryonic development of the rat cortex.</a> J. Neurosci. 25, 9752-9761 (2005).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Dev. Growth Differ. 50, 485-497 (2008).</li></ol>

ישנם שני שלבים קריטיים WEC מכרסם להצלחה. ראשית, הליך לנתיחה צריך להיות מדויק ולא עוברים נזק, בעיקר כלי הדם. שנית, ההליך צריך להיות מהר ככל האפשר כי החמצן מזין אינם מסופקים דרך השליה לאחר במנותק מן הרחם. זה קריטי עוברים יותר. במקרה של WEC עכברוש לאחר E12.5, אנחנו צריכים להעביר ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערה </td></tr><tr><td colspan="5"> הגדרת WEC </td></tr><tr><td> WEC המערכת (10-0310) </td><td> כלי </td><td> Ikemoto ריקה </td><td> 010-0310 </td><td> עוד דגם קטן הוא גם זמין. </td></tr><tr><td> הסיליקון תקע ללא חור </td><td> כלי </td><td> Ikemoto ריקה </td><td> 010-032-08 </td><td></td></tr><tr><td> תערובת גז גליל </td><td> כלי </td><td> ניקו Sanso </td><td> - </td><td> מכיל 95% חמצן, פחמן דו חמצני &amp; 5%. סדר מותאם אישית. </td></tr><tr><td> גז הרגולטור </td><td> כלי </td><td> אונו Seisakusho </td><td> WR-11 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 מיקרומטר לסנן Millex GS </td><td> כלי </td><td> Millipore </td><td> SLGS033SS </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> הרדמה ובידוד של הרחם </td></tr><tr><td> מספריים גדול </td><td> כלי </td><td> Napox </td><td> B-7H </td><td></td></tr><tr><td> מצבטים </td><td> כלי </td><td> Napox </td><td> A-3-2 </td><td></td></tr><tr><td> צלחת פטרי סילוק (90 מ&quot;מ x 15 מ&quot;מ) </td><td> כלי </td><td> Iwaki </td><td> SH90-15 </td><td> עמוק סוג מאכל הוא הטוב ביותר לניתוח. </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> מגיב </td><td> אבוט </td><td> B506 </td><td> עבור הרדמה </td></tr><tr><td> Pentobarbital נתרן </td><td> מגיב </td><td> שרינג פלאו לבריאות בעלי חיים </td><td> - </td><td> עבור הרדמה </td></tr><tr><td> של מלח Tyrode </td><td> מגיב </td><td> - </td><td> - </td><td> לדברי כפרוטוקול ב Ref. 2. שמור על 4 ° C. </td></tr><tr><td> מתוזמן בהריון Sprague-Dawley עכברוש </td><td> בעל חיים </td><td> צ&#39;ארלס ריברס מעבדות יפן </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> הכנת בינוני תרבות </td></tr><tr><td> בקבוק זכוכית תרבות </td><td> כלי </td><td> Ikemoto ריקה </td><td> 010-032-05 </td><td></td></tr><tr><td> תרבות סילוק בקבוק </td><td> כלי </td><td> Ikemoto ריקה </td><td> 010-032-06 </td><td></td></tr><tr><td> הסיליקון תקע עם חור </td><td> כלי </td><td> Ikemoto ריקה </td><td> 010-032-07 </td><td></td></tr><tr><td> רדיד אלומיניום </td><td> כלי </td><td> כל חברה </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td> מעוקר שקית </td><td> כלי </td><td> Hogy </td><td> HM-26 </td><td> עבור בקבוקי תרבות </td></tr><tr><td> מעוקר שקית </td><td> כלי </td><td> Hogy </td><td> HM-14 א </td><td> עבור אטמי סיליקון </td></tr><tr><td> 0.45 מיקרומטר לסנן Millex HA </td><td> כלי </td><td> Millipore </td><td> SLHA033SS </td><td></td></tr><tr><td> 50 מ&quot;ל צינור חרוטי </td><td> כלי </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 100 מ&quot;ל כוס </td><td> כלי </td><td> Iwaki </td><td> TE-32 </td><td></td></tr><tr><td> עכברוש IC בסרום </td><td> מגיב </td><td> צ&#39;ארלס ריברס מעבדות יפן </td><td> - </td><td> עיין: מר Kunihiko Morisaki, טל: +81- (0) 45-474-9336, פקס: +81- (0) 45-474-9340 </td></tr><tr><td> D (+), גלוקוז </td><td> מגיב </td><td> Wako </td><td> 041-00595 </td><td></td></tr><tr><td> לאנטיביוטיקה antimyotic נוזלי </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 15240 </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Dissection של עוברים </td></tr><tr><td> עיניים מספריים ישר </td><td> כלי </td><td> Napox </td><td> MB50-7 </td><td> עבור חיתוך דופן הרחם </td></tr><tr><td> עיניים מספריים מעוקל </td><td> כלי </td><td> Napox </td><td> MB54-2 </td><td> עבור חיתוך שק החלמון </td></tr><tr><td> מלקחיים # 5 </td&gt; <td> כלי </td><td> מרץ </td><td> T6715 </td><td></td></tr><tr><td> מלקחיים # 5F </td><td> כלי </td><td> רגינה </td><td> T6819 </td><td></td></tr><tr><td> זכוכית פיפטה </td><td> כלי </td><td> - </td><td> - </td><td> בעבודת יד באמצעות פיפטה פסטר. </td></tr><tr><td> מעוקר שקית </td><td> כלי </td><td> Hogy </td><td> HM-4 </td><td> עבור pipettes זכוכית </td></tr><tr><td> המשקפת מיקרוסקופ </td><td> כלי </td><td> לייקה </td><td> Mz7s </td><td></td></tr><tr><td> אור </td><td> כלי </td><td> לייקה </td><td> CLS 150XD </td><td></td></tr><tr><td> שמן האבן </td><td> כלי </td><td> אושידה יוקו </td><td> 833-2000 </td><td> עבור השחזה של מלקחיים </td></tr><tr><td> מכונת שמן </td><td> כלי </td><td> אושידה יוקו </td><td> 835-0000 </td><td> עבור השחזה של מלקחיים </td></tr></tbody></table>

the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system

העובר שלמים תרבות (WEC) הטכניקה פותחה בשנת 1950 על ידי בניו של וחבריו, והגיש בקשה בביולוגיה התפתחותית 1. למרות התפתחות וצמיחה של עוברי יונקים תלויים באופן קריטי על תפקוד השליה, WEC הטכניקה מאפשרת לנו עכבר התרבות עוברי חולדה מצב vivo לשעבר בתקופות מוגבל המתאים בשלבים עובריים midgestation במהלך היום (ה &#39;) 6.5-E12.5 ב עכבר או E8.5-E14.5 בחולדה 2, 3, 4. ב WEC, אנחנו יכולים ישירות ליעד המבוקש תחומי עוברים באמצעות קנס זכוכית הנימים כי עוברי ניתן להשפיע מתחת למיקרוסקופ. לכן, WEC מכרסם הוא טכניקה שימושית מאוד כאשר אנו רוצים ללמוד תהליכים התפתחותיים הדינמי של עוברי יונקים postimplanted. עד כה, מספר סוגים של מערכות WEC פותחו 1. בין אלה, את הכתף מסוג התרבות מערכת בקבוק הוא הפופולרי ביותר מתאים לתרבות לטווח ארוך של עוברים ב midgestation, כלומר, לאחר E9.5 ואת E11.5 של העכבר חולדה, בהתאמה 1. בפרוטוקול הווידאו הזאת, אנחנו מדגימים את הנהלים הרגילה שלנו של WEC עכברוש לאחר E12.5 באמצעות מודל מזוקק של מערכת המפרק המקורי, אשר תוכנן על ידי ניו Cockroft 5, 6, ו להציג יישומים שונים של טכניקת WEC ללימודי התפתחותי יונקים הביולוגיה.

Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

טכניקה שלמים תרבות העובר מאפשר לנו עכבר התרבות עוברי חולדה<em&gt; לשעבר vivo</em&gt; מצב בתקופות מוגבל המתאים בשלבים midgestation. בפרוטוקול הווידאו הזאת, אנחנו מדגימים את הנהלים תקן של התרבות שלנו עובר שלם חולדה לאחר E12.5 באמצעות המפרק מסוג התרבות מערכת בקבוק.

שיטת התרבות העובר שלמים מכרסמים באמצעות Rotator מסוג התרבות מערכת בקבוק

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

שיטת לתרבות מוקדם של עוברים צ&#39;יק לשעבר vivo (תרבות חדש)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

עכבר עובריים תרבות ריאות, מערכת הערכת המנגנונים המולקולריים של מסעף

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

לשעבר אובו העובר עוף התרבות מתאים ליישומים הדמיה microsurgery מערכת

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

רומן<em&gt; Ex vivo</em&gt; שיטת תרבות ללב העכבר העוברית

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

עכבר עוברי פיתוח במערכת סרום ללא תרבות שלמה עובר

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

פורסים תרבות השיטה למעקב אחר ההתפתחות של חיידקים בשיני explant תרבות

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

הכנת סרום העכברוש מתאים לתרבות עובר שלמה יונקים

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

הקמת מערכת התרבות pH חומצי חוץ-תאית

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...

Evaluating the Angiogenetic Properties of Ovarian Cancer Stem-Like Cells using the Three-Dimensional Co-Culture System, NICO-1

הערכת התכונות האנגיוגנטיות של תאים דמויי גזע של סרטן השחלות באמצעות מערכת תרבית קו-תרבית תלת-ממדית, NICO-1

Cancer stem cells (CSCs) reside in a supportive niche, constituting a microenvironment comprised of adjacent stromal cells, vessels, and extracellular ...

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus AAV2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

פיתוח תהליכים לייצור וטיהור של וירוס הקשורים לאדנו (AAV)2 וקטור באמצעות מערכת תרבית תאים של חרקים בקלווירוס

Adeno-associated viruses (AAV) are promising vectors for gene therapy applications. Here, the AAV2 vector is produced by co-culture of Spodoptera ...