Name: the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system
Uploaded: 2010-08-28T17:00:00
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우리는 비디오를 편집 비디오 녹화 및 유용한 조언 씨 하지메 이치 감사합니다. 우리는 또한 비디오 녹화 종류의 조수에 대한 Drs.Yuji Tsunekawa 및 가이치 요시 자키 감사드립니다. 이 작품은 젊은 과학자의 B와 일본의 MEXT에서 우선 분야 - 분자 뇌 과학에 KAKENHI에 의해 지원됩니다. 우리의 지원을 인정 글로벌 COE 일본어 과학 기술기구 (일본 표준시)에서 일본어 과학 기술 주식 회사에서 진화론적인 과학 기술에 대한 일본의 MEXT에서 프로그램 &quot;글로벌 브레인 과학에 대한 기본 및 Translational 연구 센터&quot;와 핵심 연구 (크레스트) .

1. WEC 시스템을 설정 <ol><li> 공동 WEC 시스템 내에서 유입 실리콘 튜브 필터 0.22 μm의 막). </li><li> O 2 (95 %)과 CO 2 (5 %)이있는 가스 실린더의 밸브를 엽니다. autoclaved 물이 들어있는 버블링 병을 통해 드럼에 가스 혼합물을 흐름. </li><li> 50 CC로 가스 혼합물의 흐름 볼륨을 조정합니다. </li><li> 밖은 물통에 실리콘 튜브를하자 및 가스 혼합물의 흐름을 체크 아웃 넣습니다. </li><li...

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	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoroduction.+In+mammalian+postimplantation+embryos.">Intoroduction. In mammalian postimplantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Cockroft, D. L., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+culture+of+post+implantation+embryos.">Dissection and culture of post implantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 15-40 (1990).</li><li>Morris-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mammalian+embryos.">Postimplantation mammalian embryos.</a> Essential Developmental Biology A Practical Approach. , 55-66 (1993).</li><li>Fujinaga, M., Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+rodent+embryos+during+the+early+postimplantation+period.">In vitro culture of rodent embryos during the early postimplantation period.</a> Developmental Biology Protocols. , 53-76 (2000).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase.">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li><li>Osumi-Yamashita, N., Ninomiya, Y., Eto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+craniofacial+embryology+in+vitro.">Mammalian craniofacial embryology in vitro.</a> Int. J. Dev. Biol. 41, 187-194 (1997).</li><li>Inoue, T., Nakamura, S., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+of+the+mouse+prosencephalic+neural+plate.">Fate mapping of the mouse prosencephalic neural plate.</a> Dev. 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Cell Sci. 116, 4947-4955 (2003).</li><li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li><li>Arai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fabp7,+a+downstream+gene+of+Pax6,+in+the+maintenance+of+neuroepithelial+cells+during+early+embryonic+development+of+the+rat+cortex.">Role of Fabp7, a downstream gene of Pax6, in the maintenance of neuroepithelial cells during early embryonic development of the rat cortex.</a> J. 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성공을 위해 쥐 WEC의 두 중요한 단계가 있습니다. 첫째, 절개 절차 아니라 특히 태아 손상, 혈관을 정확하게해야합니다. 산소와 영양소가 더 이상 자궁에서 분리 후 태반을 통해 공급 없기 때문에 둘째, 절차는 가능한 한 빨리해야합니다. 이것은 기존의 배아를 위해 중요합니다. E12.5 후 쥐 WEC의 경우, 우리는 30 분 이내에 문화 병으로 해부하는 배아를 전송해야합니다. 우리는 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 유형 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 논평 </td></tr><tr><td colspan="5"> WEC 설정 </td></tr><tr><td> WEC 시스템 (10-0310) </td><td> 도구 </td><td> 이케 모토 리카 </td><td> 010-0310 </td><td> 또 다른 작은 모델도 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> 구멍없이 실리콘 플러그 </td><td> 도구 </td><td> 이케 모토 리카 </td><td> 010-032-08 </td><td></td></tr><tr><td> 가스 혼합물 실린더 </td><td> 도구 </td><td> 닛코 Sanso </td><td> - </td><td> 95 %의 산소 및 5 % 이산화탄소를 포함하는. 맞춤 주문하십시오. </td></tr><tr><td> 가스 조정기 </td><td> 도구 </td><td> 오노 제작소 </td><td> WR - 11 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 μm의 필터 Millex GS </td><td> 도구 </td><td> Millipore </td><td> SLGS033SS </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> 마취와 자궁의 분리 </td></tr><tr><td> 대형 가위 </td><td> 도구 </td><td> Napox </td><td> B - 7H </td><td></td></tr><tr><td> 집게 </td><td> 도구 </td><td> Napox </td><td> - 3 - 2 </td><td></td></tr><tr><td> 처리 페트리 접시 (90mm X 15mm) </td><td> 도구 </td><td> 이와키 </td><td> SH90 - 15 </td><td> 딥 타입 접시 해부위한 최상입니다. </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td> 시약 </td><td> 애보트 </td><td> B506 </td><td> 마취에 대한 </td></tr><tr><td> Pentobarbital 나트륨 </td><td> 시약 </td><td> 셔링 - 플로 동물 건강 </td><td> - </td><td> 마취에 대한 </td></tr><tr><td> Tyrode의 염분 </td><td> 시약 </td><td> - </td><td> - </td><td> 심판의 프로토콜로했다. 2. 4 저장 ° C. </td></tr><tr><td> 시간 초과 - 임신 스프 라그 - 돌리 랫 </td><td> 동물 </td><td> 찰스 리버스 연구소 일본 </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> 문화 매체의 준비 </td></tr><tr><td> 문화 유리병 </td><td> 도구 </td><td> 이케 모토 리카 </td><td> 010-032-05 </td><td></td></tr><tr><td> 폐기 문화 병 </td><td> 도구 </td><td> 이케 모토 리카 </td><td> 010-032-06 </td><td></td></tr><tr><td> 구멍 실리콘 플러그 </td><td> 도구 </td><td> 이케 모토 리카 </td><td> 010-032-07 </td><td></td></tr><tr><td> 알루미늄 호일 </td><td> 도구 </td><td> 모든 회사 </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td> Autoclaving 가방 </td><td> 도구 </td><td> Hogy </td><td> HM - 26 </td><td> 문화 병에 대한 </td></tr><tr><td> Autoclaving 가방 </td><td> 도구 </td><td> Hogy </td><td> HM - 14A </td><td> 실리콘 플러그를위한 </td></tr><tr><td> 0.45 μm의 필터 Millex HA </td><td> 도구 </td><td> Millipore </td><td> SLHA033SS </td><td></td></tr><tr><td> 50 ML 원뿔 관 </td><td> 도구 </td><td> 백톤 디킨슨 </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 100 ML의 비커 </td><td> 도구 </td><td> 이와키 </td><td> TE - 32 </td><td></td></tr><tr><td> 랫 IC 혈청 </td><td> 시약 </td><td> 찰스 리버스 연구소 일본 </td><td> - </td><td> 을 참조하십시오 : 미스터 Kunihiko 모리 사키를 TEL : +81- (0) 45-474-9336, FAX : +81- (0) 45-474-9340 </td></tr><tr><td> D (+) 포도당 </td><td> 시약 </td><td> 와코 </td><td> 041-00595 </td><td></td></tr><tr><td> 항생제 - antimyotic 액체 </td><td> 시약 </td><td> Gibco </td><td> 15,240 </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> 태아의 해부 </td></tr><tr><td> 안과 직선 가위 </td><td> 도구 </td><td> Napox </td><td> MB50 - 7 </td><td> 자궁 벽 절단 </td></tr><tr><td> 안과 곡선 가위 </td><td> 도구 </td><td> Napox </td><td> MB54 - 2 </td><td> 난황을 절단 </td></tr><tr><td> 집게 # 5 </td&gt; <td> 도구 </td><td> 활기 </td><td> T6715 </td><td></td></tr><tr><td> 집게 # 5F </td><td> 도구 </td><td> Regine </td><td> T6819 </td><td></td></tr><tr><td> 유리 피펫 </td><td> 도구 </td><td> - </td><td> - </td><td> 파스퇴르 피펫을 사용하여 수작업으로했다. </td></tr><tr><td> Autoclaving 가방 </td><td> 도구 </td><td> Hogy </td><td> HM - 4 </td><td> 유리 pipettes에 대한 </td></tr><tr><td> 쌍안 현미경 </td><td> 도구 </td><td> Leica </td><td> Mz7s </td><td></td></tr><tr><td> 빛 </td><td> 도구 </td><td> Leica </td><td> CLS 150XD </td><td></td></tr><tr><td> 오일 돌 </td><td> 도구 </td><td> 우치다 요코 </td><td> 833-2000 </td><td> 포셉의 선명에 대한 </td></tr><tr><td> 기계 기름 </td><td> 도구 </td><td> 우치다 요코 </td><td> 835-0000 </td><td> 포셉의 선명에 대한 </td></tr></tbody></table>

the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system

전체 배아 문화 (WEC) 기술은 신규 및 그의 동료에 의해 ​​1950 년대에 개발하고, 발달 생물학 1 적용되었습니다. 포유 동물 배아의 발전과 성장은 태반의 기능에 매우 의존하고 있지만, WEC 기술은 우리의 배아 일 (E) 6.5 - E12.5 동안 midgestation 단계에 해당하는 제한된 기간 동안 문화 마우스 및 쥐 배아 전 생체내 조건 수 마우스 또는 쥐 2, 3, 4 E8.5 - E14.5. 배아는 현미경으로 조절할 수 있기 때문에 WEC에서, 우리는 직접적으로 고급 유리 모세관을 사용하여 태아의 영역을 원하는 타겟팅할 수 있습니다. 우리가 postimplanted 포유류의 배아 발달의 동적 과정을 공부하고 싶을 때 따라서, 쥐 WEC는 매우 유용한 기술입니다. 최신, WEC 시스템을 여러 종류의는 1을 개발하고 있습니다. 그 중에서도 회전 형 병 문화 시스템은 각각 1 마우스 및 쥐에 E9.5와 E11.5, 후 가장 인기있는 midgestation 즉,에서 배아의 장기적인 문화에 적합합니다. 이 비디오 프로토콜에서는, 우리는 새로 콕크 로프트 5, 6에 의해 설계되었지만 원래 회전 시스템의 세련된 모델을 사용 E12.5 후 쥐 WEC의 표준 절차를 입증하고, 포유류의 발달에 연구 WEC 기술의 다양한 응용 프로그램을 소개합니다 생물학.

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The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

전체 배아 문화 기술 문화 마우스 및 쥐 배아 우리에게 수<em&gt; 예 생체내</emmidgestation 단계에 해당하는 제한 기간&gt; 상태. 이 비디오 프로토콜에서는, 우리는 회전 형 병 문화 시스템을 사용 E12.5 후 쥐의 배아 전체가 문화의 표준 절차를 보여줍니다.

회전 형 바틀 문화 시스템을 사용 로던트 전체 엠브료 문화의 방법

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

조기 칙 태아 예 생체내 (새로운 문화)의 문화에 대한 방법

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

연구

생물학

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

마우스 배아의 폐 문화, 분기의 분자 메커니즘을 평가하는 시스템

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

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전 비켜</em이미징 및 미세 애플 리케이션에 적합> 치킨의 배아 문화 시스템

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

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소설<em&gt; 생체</em배아 마우스 사랑을&gt; 문화 방법

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

무 혈청 전체 배아 배양 시스템에서 마우스 배아 개발

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

이식편 문화 치아 세균의 개발을 다음과 같은 사항에 대해 슬라이스 문화 방법

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

포유류의 전체 배아 문화에 적합 쥐 혈청의 제조

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

세포 외 산 성 pH 문화 체계의 설립

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...

Evaluating the Angiogenetic Properties of Ovarian Cancer Stem-Like Cells using the Three-Dimensional Co-Culture System, NICO-1

3차원 공동배양시스템을 이용한 난소암 줄기유사세포의 혈관신생적 특성 평가 NICO-1

Cancer stem cells (CSCs) reside in a supportive niche, constituting a microenvironment comprised of adjacent stromal cells, vessels, and extracellular ...

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus AAV2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

바쿨로바이러스-곤충세포배양시스템을 이용한 아데노 관련 바이러스(AAV)2 벡터의 생산 및 정화를 위한 공정 개발

Adeno-associated viruses (AAV) are promising vectors for gene therapy applications. Here, the AAV2 vector is produced by co-culture of Spodoptera ...