Name: the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system
Uploaded: 2010-08-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

Мы благодарим г-н Хадзимэ Ichijo для видео-записи и полезные советы для редактирования видео. Мы также благодарим Drs.Yuji Tsunekawa и кайчи Yoshizaki за добрые помощник для видео-записи. Эта работа проводится при поддержке KAKENHI на молодых ученых и B в приоритетных областях,-молекулярной наук о мозге от MEXT Японии. Мы признаем, поддержке Глобального COE Программа «Базовые и трансляционных исследований Центра глобального науке мозга&quot; от MEXT Японии и основной исследовательской эволюционной науки и техники (CREST) ​​от японской науки и техники от японской корпорации науки и техники агентство (JST) .

1. Настройка системы ВЭС <ol><li> Совместное 0,22 мкм мембранный фильтр для трубки кремния входе в системы ВЭС). </li><li> Откройте клапан газового баллона содержащего O 2 (95%) и CO 2 (5%). Поток газовой смеси в барабан через пузырящийся флакон, содержащий автоклавного воды. </li><li> Отре?...

<ol>
	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoroduction.+In+mammalian+postimplantation+embryos.">Intoroduction. In mammalian postimplantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Cockroft, D. L., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+culture+of+post+implantation+embryos.">Dissection and culture of post implantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 15-40 (1990).</li><li>Morris-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mammalian+embryos.">Postimplantation mammalian embryos.</a> Essential Developmental Biology A Practical Approach. , 55-66 (1993).</li><li>Fujinaga, M., Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+rodent+embryos+during+the+early+postimplantation+period.">In vitro culture of rodent embryos during the early postimplantation period.</a> Developmental Biology Protocols. , 53-76 (2000).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase.">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li><li>Osumi-Yamashita, N., Ninomiya, Y., Eto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+craniofacial+embryology+in+vitro.">Mammalian craniofacial embryology in vitro.</a> Int. J. Dev. Biol. 41, 187-194 (1997).</li><li>Inoue, T., Nakamura, S., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+of+the+mouse+prosencephalic+neural+plate.">Fate mapping of the mouse prosencephalic neural plate.</a> Dev. Biol. 219, 373-383 (2000).</li><li>Nomura, T., Holmberg, J., Frisen, J., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6-dependent+boundary+defines+alignment+of+migrating+olfactory+cortex+neurons+via+the+repulsive+activity+of+ephrin+A5.">Pax6-dependent boundary defines alignment of migrating olfactory cortex neurons via the repulsive activity of ephrin A5.</a> Development. 133, 1335-1345 (2006).</li><li>Inoue, Y. U., Asami, J., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+of+mouse+rhombomeres+by+Cadherin-6::EGFP-BAC+transgenesis+underscores+the+role+of+cadherins+in+hindbrain+compartmentalization.">Genetic labeling of mouse rhombomeres by Cadherin-6::EGFP-BAC transgenesis underscores the role of cadherins in hindbrain compartmentalization.</a> Neurosci. Res. 63, 2-9 (2009).</li><li>Calegari, F., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibition+of+cyclin-dependent+kinases+that+lengthens,+but+does+not+arrest,+neuroepithelial+cell+cycle+induces+premature+neurogenesis.">An inhibition of cyclin-dependent kinases that lengthens, but does not arrest, neuroepithelial cell cycle induces premature neurogenesis.</a> J. Cell Sci. 116, 4947-4955 (2003).</li><li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li><li>Arai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fabp7,+a+downstream+gene+of+Pax6,+in+the+maintenance+of+neuroepithelial+cells+during+early+embryonic+development+of+the+rat+cortex.">Role of Fabp7, a downstream gene of Pax6, in the maintenance of neuroepithelial cells during early embryonic development of the rat cortex.</a> J. Neurosci. 25, 9752-9761 (2005).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Dev. Growth Differ. 50, 485-497 (2008).</li></ol>

Есть два важных шагов в грызун ВЭС для успеха. Во-первых, процедура вскрытия должна быть точной, чтобы не повредить эмбрионов, особенно кровеносные сосуды. Во-вторых, процедура должна быть как можно быстрее, потому что кислород и питательные больше не поставляется через плаценту после в...

<table border="1"><tbody><tr><td> Имя </td><td> Тип </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарий </td></tr><tr><td colspan="5"> Настройка WEC </td></tr><tr><td> WEC системы (10-0310) </td><td> Инструмент </td><td> Икемото Rika </td><td> 010-0310 </td><td> Другая маленькая модель также доступна. </td></tr><tr><td> Кремний подключить без отверстия </td><td> Инструмент </td><td> Икемото Rika </td><td> 010-032-08 </td><td></td></tr><tr><td> Цилиндре газовой смеси </td><td> Инструмент </td><td> Nikko Sanso </td><td> - </td><td> Содержащие 95% кислорода и 5% углекислого газа. Индивидуальный заказ. </td></tr><tr><td> Газовый регулятор </td><td> Инструмент </td><td> Оно Seisakusho </td><td> WR-11 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 мкм фильтр Millex GS </td><td> Инструмент </td><td> Millipore </td><td> SLGS033SS </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Анестезия и изоляция матки </td></tr><tr><td> Большие ножницы </td><td> Инструмент </td><td> Napox </td><td> В-7Н </td><td></td></tr><tr><td> Щипцы </td><td> Инструмент </td><td> Napox </td><td> -3-2 </td><td></td></tr><tr><td> Удаление блюдо Петри (90 мм х 15 мм) </td><td> Инструмент </td><td> Иваки </td><td> SH90-15 </td><td> Глубокая типа блюдо лучше всего подходит для вскрытия. </td></tr><tr><td> Изофлюрана </td><td> Реагент </td><td> Abbott </td><td> B506 </td><td> Для анестезии </td></tr><tr><td> Фенобарбиталом натрия </td><td> Реагент </td><td> Schering-Plough Animal Health </td><td> - </td><td> Для анестезии </td></tr><tr><td> Тирода солевой </td><td> Реагент </td><td> - </td><td> - </td><td> Согласно протоколу, как в работе. 2. Сохранить при 4 ° C. </td></tr><tr><td> Временный беременных Sprague-Dawley крыс </td><td> Животное </td><td> Чарльз Реки лабораторий Японии </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Подготовка питательной среды </td></tr><tr><td> Бутылки стеклянные культуры </td><td> Инструмент </td><td> Икемото Rika </td><td> 010-032-05 </td><td></td></tr><tr><td> Бутылка удалением культуры </td><td> Инструмент </td><td> Икемото Rika </td><td> 010-032-06 </td><td></td></tr><tr><td> Кремний вилка с отверстием </td><td> Инструмент </td><td> Икемото Rika </td><td> 010-032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Алюминиевая фольга </td><td> Инструмент </td><td> Любая компания, </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td> Автоклавирование сумки </td><td> Инструмент </td><td> Hogy </td><td> HM-26 </td><td> Для культуры бутылки </td></tr><tr><td> Автоклавирование сумки </td><td> Инструмент </td><td> Hogy </td><td> HM-14A </td><td> Для силиконовыми заглушками </td></tr><tr><td> 0,45 мкм фильтр Millex HA </td><td> Инструмент </td><td> Millipore </td><td> SLHA033SS </td><td></td></tr><tr><td> 50 мл коническую трубку </td><td> Инструмент </td><td> Becton Dickinson </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 100 мл стакан </td><td> Инструмент </td><td> Иваки </td><td> TE-32 </td><td></td></tr><tr><td> Крыса IC сыворотке </td><td> Реагент </td><td> Чарльз Реки лабораторий Японии </td><td> - </td><td> См.: Г-н Кунихико Морисаки, TEL: +81- (0) 45-474-9336, факс: +81- (0) 45-474-9340 </td></tr><tr><td> D (+)-Глюкоза </td><td> Реагент </td><td> Вако </td><td> 041-00595 </td><td></td></tr><tr><td> Антибиотик-antimyotic жидкости </td><td> Реагент </td><td> Гибко </td><td> 15240 </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Вскрытие эмбрионов </td></tr><tr><td> Офтальмология прямыми ножницами </td><td> Инструмент </td><td> Napox </td><td> MB50-7 </td><td> Для резки стенки матки </td></tr><tr><td> Офтальмология изогнутые ножницы </td><td> Инструмент </td><td> Napox </td><td> MB54-2 </td><td> Для резки желточного мешка </td></tr><tr><td> Пинцет # 5 </td&gt; <td> Инструмент </td><td> Энергия </td><td> T6715 </td><td></td></tr><tr><td> Пинцет # 5F </td><td> Инструмент </td><td> Регина </td><td> T6819 </td><td></td></tr><tr><td> Стекло пипетки </td><td> Инструмент </td><td> - </td><td> - </td><td> Сделано вручную с помощью пипетки Пастера. </td></tr><tr><td> Автоклавирование сумки </td><td> Инструмент </td><td> Hogy </td><td> HM-4 </td><td> Для стеклянных пипеток </td></tr><tr><td> Бинокулярный микроскоп </td><td> Инструмент </td><td> Leica </td><td> Mz7s </td><td></td></tr><tr><td> Свет </td><td> Инструмент </td><td> Leica </td><td> CLS 150XD </td><td></td></tr><tr><td> Нефть камень </td><td> Инструмент </td><td> Uchida Yoko </td><td> 833-2000 </td><td> Для заточки щипцов </td></tr><tr><td> Машинное масло </td><td> Инструмент </td><td> Uchida Yoko </td><td> 835-0000 </td><td> Для заточки щипцов </td></tr></tbody></table>

the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system

Всего культивирования эмбрионов (ВЭС) методика была разработана в 1950 году по количеству новых и его коллегами, и применяется для биологии развития 1. Хотя развитие и рост эмбрионов млекопитающих критически зависят от функции плаценты, ВЭС техника позволяет мыши культуры и крысиных эмбрионов бывших естественных условиях в течение ограниченного периода соответствующее середине беременности этапах эмбрионального день (E) 6,5-E12.5 в мышь или E8.5-E14.5 у крыс 2, 3, 4. В ВЭС, мы можем непосредственно целевой требуемых областях эмбрионов с использованием тонких стеклянных капилляров, поскольку эмбрионы можно управлять под микроскопом. Таким образом, грызунов ВЭС очень полезный метод, когда мы хотим для изучения динамических процессов развития в postimplanted эмбрионов млекопитающих. На сегодняшний день, несколько видов ВЭС системы были разработаны 1. Среди тех, поворотное устройство типа бутылки культуре системы наиболее популярны и подходят для долгосрочных культуры эмбрионов в середине беременности, т. е. после E9.5 и E11.5 у мышей и крыс, соответственно 1. В этом видео-протокол, мы демонстрируем наши стандартные процедуры крысы ВЭС после E12.5 использованием изысканные модели оригинального поворотного устройства системы, который был разработан новый и 5 Кокрофт, 6, и внедрить различные приложения ВЭС технику для исследований в развитии млекопитающих биологии.

Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

Всего техника культуре эмбрионов позволяет мыши культуры и крысиных эмбрионов<em&gt; Исключая виво</em&gt; Состоянии в течение ограниченного периода соответствующее середине беременности этапов. В этом видео-протокол, мы демонстрируем наши стандартные процедуры крысы целая культура эмбриона после E12.5 использовании поворотного устройства типа бутылки системе культуры.

Метод грызунов Всего культуры эмбрионов использованием Rotator типа бутылки культуры система

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Метод культуры раннего куриных эмбрионов исключая виво (Новая Культура)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

Мышиных эмбриональных легких культуры, системы оценки Молекулярные механизмы Ветвление

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

Экс-ово Куриного эмбриона культуры систему, пригодную для обработки изображений и микрохирургии Приложения

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Роман<em&gt; Экс естественных</em&gt; Культура Метод эмбриональном сердце мыши

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Мышь эмбрионального развития целая культура системе эмбрионов бессывороточных

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Кусочек Культура Метод После Развитие Зуб микробов в эксплантата культуры

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Подготовка сыворотки крыс Подходит для млекопитающих всей эмбрионов культуры

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Создание внеклеточного кислой рН культуры системы

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...

Evaluating the Angiogenetic Properties of Ovarian Cancer Stem-Like Cells using the Three-Dimensional Co-Culture System, NICO-1

Оценка ангиогенетических свойств стволовых клеток рака яичников с использованием трехмерной системы кокультур, NICO-1

Cancer stem cells (CSCs) reside in a supportive niche, constituting a microenvironment comprised of adjacent stromal cells, vessels, and extracellular ...

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus AAV2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Разработка процесса производства и очистки переносчика аденоассоциированного вируса (AAV)2 с использованием системы культивирования клеток бакуловирус-насекомое

Adeno-associated viruses (AAV) are promising vectors for gene therapy applications. Here, the AAV2 vector is produced by co-culture of Spodoptera ...