Name: the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system
Uploaded: 2010-08-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

Agradecemos al Sr. Hajime Ichijo por los consejos de grabación en vídeo y útil para la edición de vídeo. También agradecemos a Drs.Yuji Tsunekawa y Yoshizaki Kaichi de tipo asistente para la grabación en vídeo. Este trabajo es apoyado por KAKENHI en B para jóvenes científicos y la ciencia del cerebro áreas prioritarias-molecular de MEXT de Japón. Queremos agradecer el apoyo de Global COE Programa &quot;Centro de investigación básica y traslacional de la Ciencia del Cerebro Global&quot; de MEXT de Japón y la investigación central para la Ciencia Evolutiva y de la Tecnología (CREST) ​​de la Ciencia y la Corporación Japonesa de Ciencia Tecnología japonesa y Tecnología (JST) .

1. La creación del sistema WEC <ol><li> Conjunto de una membrana de 0,22 micras filtro a la entrada del tubo de silicona dentro del sistema de WEC a). </li><li> Abra la válvula de un cilindro de gas que contiene O 2 (95%) y CO 2 (5%). El flujo de la mezcla de gas en el tambor a través de la botella de burbujas que contienen agua esterilizada. </li><li> Ajustar el volumen del flujo de la mezcla de gas de 50 cc. </li><li> Inserte el tubo de silicona a dejar en una botella de agua de s...

<ol>
	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoroduction.+In+mammalian+postimplantation+embryos.">Intoroduction. In mammalian postimplantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Cockroft, D. L., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+culture+of+post+implantation+embryos.">Dissection and culture of post implantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 15-40 (1990).</li><li>Morris-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mammalian+embryos.">Postimplantation mammalian embryos.</a> Essential Developmental Biology A Practical Approach. , 55-66 (1993).</li><li>Fujinaga, M., Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+rodent+embryos+during+the+early+postimplantation+period.">In vitro culture of rodent embryos during the early postimplantation period.</a> Developmental Biology Protocols. , 53-76 (2000).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase.">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li><li>Osumi-Yamashita, N., Ninomiya, Y., Eto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+craniofacial+embryology+in+vitro.">Mammalian craniofacial embryology in vitro.</a> Int. J. Dev. Biol. 41, 187-194 (1997).</li><li>Inoue, T., Nakamura, S., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+of+the+mouse+prosencephalic+neural+plate.">Fate mapping of the mouse prosencephalic neural plate.</a> Dev. Biol. 219, 373-383 (2000).</li><li>Nomura, T., Holmberg, J., Frisen, J., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6-dependent+boundary+defines+alignment+of+migrating+olfactory+cortex+neurons+via+the+repulsive+activity+of+ephrin+A5.">Pax6-dependent boundary defines alignment of migrating olfactory cortex neurons via the repulsive activity of ephrin A5.</a> Development. 133, 1335-1345 (2006).</li><li>Inoue, Y. U., Asami, J., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+of+mouse+rhombomeres+by+Cadherin-6::EGFP-BAC+transgenesis+underscores+the+role+of+cadherins+in+hindbrain+compartmentalization.">Genetic labeling of mouse rhombomeres by Cadherin-6::EGFP-BAC transgenesis underscores the role of cadherins in hindbrain compartmentalization.</a> Neurosci. Res. 63, 2-9 (2009).</li><li>Calegari, F., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibition+of+cyclin-dependent+kinases+that+lengthens,+but+does+not+arrest,+neuroepithelial+cell+cycle+induces+premature+neurogenesis.">An inhibition of cyclin-dependent kinases that lengthens, but does not arrest, neuroepithelial cell cycle induces premature neurogenesis.</a> J. Cell Sci. 116, 4947-4955 (2003).</li><li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li><li>Arai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fabp7,+a+downstream+gene+of+Pax6,+in+the+maintenance+of+neuroepithelial+cells+during+early+embryonic+development+of+the+rat+cortex.">Role of Fabp7, a downstream gene of Pax6, in the maintenance of neuroepithelial cells during early embryonic development of the rat cortex.</a> J. Neurosci. 25, 9752-9761 (2005).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Dev. Growth Differ. 50, 485-497 (2008).</li></ol>

Hay dos pasos críticos en el CME de roedores para el éxito. En primer lugar, el procedimiento de disección debe ser precisa, no para los embriones de los daños, especialmente en los vasos sanguíneos. En segundo lugar, el procedimiento debe ser lo más rápido posible porque el oxígeno y los nutrientes no son suministrados a través de la placenta después del aislamiento del útero. Esto es crítico para mayores embriones. En el caso de las ratas después de WEC E12.5, debemos transferir embriones disecados en fra...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre </td><td> Tipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentario </td></tr><tr><td colspan="5"> La creación de WEC </td></tr><tr><td> WEC sistema (10-0.310) </td><td> Herramienta </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-0310 </td><td> Otro pequeño modelo también está disponible. </td></tr><tr><td> Silicio enchufe sin un agujero </td><td> Herramienta </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-08 </td><td></td></tr><tr><td> Cilindros de gas mezcla </td><td> Herramienta </td><td> Nikko Sanso </td><td> - </td><td> Que contiene 95% de oxígeno y 5% de dióxido de carbono. La orden de encargo. </td></tr><tr><td> Regulador de gas </td><td> Herramienta </td><td> Ono Seisakusho </td><td> WR-11 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 micras filtro Millex GS </td><td> Herramienta </td><td> Millipore </td><td> SLGS033SS </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Anestesia y aislamiento del útero </td></tr><tr><td> Tijeras grandes </td><td> Herramienta </td><td> Napox </td><td> B-7H </td><td></td></tr><tr><td> Fórceps </td><td> Herramienta </td><td> Napox </td><td> A-3-2 </td><td></td></tr><tr><td> Eliminación de placa de Petri (90 mm x 15 mm) </td><td> Herramienta </td><td> Iwaki </td><td> SH90-15 </td><td> Profundidad de tipo plato es el mejor para la disección. </td></tr><tr><td> Isoflurano </td><td> Reactivo </td><td> Abbott </td><td> B506 </td><td> Para la anestesia </td></tr><tr><td> Pentobarbital sódico </td><td> Reactivo </td><td> Schering-Plough Animal Health </td><td> - </td><td> Para la anestesia </td></tr><tr><td> Tyrode solución salina </td><td> Reactivo </td><td> - </td><td> - </td><td> Según el protocolo en la referencia. 2. Guardar a 4 ° C. </td></tr><tr><td> Cronometrada embarazadas ratas Sprague-Dawley </td><td> Animal </td><td> Carlos Ríos Laboratorios Japón </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Preparación del medio de cultivo </td></tr><tr><td> Cultura botella de vidrio </td><td> Herramienta </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-05 </td><td></td></tr><tr><td> Disposición frasco de cultivo </td><td> Herramienta </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-06 </td><td></td></tr><tr><td> Silicio enchufe con agujero </td><td> Herramienta </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Lámina de aluminio </td><td> Herramienta </td><td> Cualquier empresa </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td> Bolsa de autoclave </td><td> Herramienta </td><td> Hogy </td><td> HM-26 </td><td> Para las botellas de la cultura </td></tr><tr><td> Bolsa de autoclave </td><td> Herramienta </td><td> Hogy </td><td> HM-14A </td><td> De tapones de silicona </td></tr><tr><td> 0,45 micras filtro Millex HA </td><td> Herramienta </td><td> Millipore </td><td> SLHA033SS </td><td></td></tr><tr><td> Tubo cónico de 50 ml </td><td> Herramienta </td><td> Becton Dickinson </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> Vaso de 100 ml </td><td> Herramienta </td><td> Iwaki </td><td> TE-32 </td><td></td></tr><tr><td> Rata IC suero </td><td> Reactivo </td><td> Carlos Ríos Laboratorios Japón </td><td> - </td><td> Se refieren a: el Sr. Kunihiko Morisaki, TEL: +81- (0) 45-474-9336, Fax: +81- (0) 45-474-9340 </td></tr><tr><td> D (+)-glucosa </td><td> Reactivo </td><td> Wako </td><td> 041-00595 </td><td></td></tr><tr><td> Los antibióticos líquidos antimyotic </td><td> Reactivo </td><td> Gibco </td><td> 15240 </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> La disección de embriones </td></tr><tr><td> Oftálmica recta tijeras </td><td> Herramienta </td><td> Napox </td><td> MB50-7 </td><td> Para el corte de la pared uterina </td></tr><tr><td> Oftálmica tijeras curvas </td><td> Herramienta </td><td> Napox </td><td> MB54-2 </td><td> Para el corte del saco vitelino </td></tr><tr><td> Pinzas # 5 </td&gt; <td> Herramienta </td><td> Vigor </td><td> T6715 </td><td></td></tr><tr><td> Pinzas # 5F </td><td> Herramienta </td><td> Regine </td><td> T6819 </td><td></td></tr><tr><td> Pipeta </td><td> Herramienta </td><td> - </td><td> - </td><td> Hecho a mano con pipeta Pasteur. </td></tr><tr><td> Bolsa de autoclave </td><td> Herramienta </td><td> Hogy </td><td> HM-4 </td><td> Para pipetas de vidrio </td></tr><tr><td> Microscopio binocular </td><td> Herramienta </td><td> Leica </td><td> Mz7s </td><td></td></tr><tr><td> Luz </td><td> Herramienta </td><td> Leica </td><td> CLS 150XD </td><td></td></tr><tr><td> Aceite de piedra </td><td> Herramienta </td><td> Uchida Yoko </td><td> 833-2000 </td><td> Para el afilado de las pinzas </td></tr><tr><td> Aceite de máquina </td><td> Herramienta </td><td> Uchida Yoko </td><td> 835-0000 </td><td> Para el afilado de las pinzas </td></tr></tbody></table>

the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system

Toda una cultura de embriones (WEC) técnica ha sido desarrollada en 1950 por nuevas y sus colegas, y se aplica para la biología del desarrollo 1. Aunque el desarrollo y el crecimiento de los embriones de mamíferos son críticamente dependientes de la función de la placenta, la técnica del CME de ratón nos permite la cultura y la condición de embriones de rata ex vivo durante períodos limitados correspondientes a las etapas mitad de la gestación durante el día embrionario (E) de 6.5 E12.5 en el ratón o E8.5-E14.5 en la rata 2, 3, 4. En WEC, podemos directamente de destino deseado áreas de embriones utilizando finos capilares de vidrio porque los embriones pueden ser manipulados bajo el microscopio. Por lo tanto, el CME de roedores es una técnica muy útil cuando queremos estudiar los procesos dinámicos de desarrollo de los embriones de mamíferos postimplanted. Hasta la fecha, varios tipos de sistemas de CME han sido desarrollados 1. Entre ellos, el sistema rotatorio botella-el tipo de cultivo es el más popular y apto para el cultivo prolongado de embriones en mitad de la gestación, es decir, después de E9.5 y E11.5 en el ratón y la rata, respectivamente 1. En este protocolo de video, demostramos nuestros procedimientos estándar de WEC ratas después de E12.5 con un modelo perfeccionado del sistema original de los rotadores, que fue diseñado por nuevos y Cockroft 5, 6, y la introducción de diversas aplicaciones de la técnica del CME para los estudios en mamíferos de desarrollo la biología.

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The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

Toda técnica de cultivo de embriones de ratón nos permite la cultura y embriones de rata<em&gt; Ex vivo</em&gt; Condición durante períodos limitados correspondientes a las etapas mitad de la gestación. En este protocolo de video, demostramos nuestros procedimientos estándar de cultivo de embriones de ratas después de todo E12.5 utilizando el sistema de botella de los rotadores, el tipo de cultivo.

El método de cultivo de embriones de roedores enteros utilizando el sistema de tipo de botella rotador Cultura

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

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