Name: the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system
Uploaded: 2010-08-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

Vi tackar Mr Hajime Ichijo för video-inspelning och hjälpsamma råd för redigering av video. Vi tackar också Drs.Yuji Tsunekawa och Kaichi Yoshizaki för slags assistent för video-inspelning. Detta arbete stöds av KAKENHI på unga forskare B och på prioriterade områden, Molecular Brain Science från MEXT av Japan. Vi erkänner stöd för globala COE-programmet &quot;Grundläggande och translationell forskning Center for Global Brain Science&quot; från MEXT i Japan och kärnan forskning för EVOLUTIONS-vetenskap och teknik (CREST) ​​från japanska vetenskaps-och Technology Corporation från japanska vetenskap och teknik Agency (JST) .

1. Ställa in WEC-systemet <ol><li> Gemensam ett 0,22 ìm membranfilter till inloppet kisel röret i WEC systemet en). </li><li> Öppna ventilen till en gasflaska med O 2 (95%) och CO 2 (5%). Flow gasblandningen in i trumman via bubblande flaska innehåller autoklaveras vatten. </li><li> Justera flödet volym gasblandningen 50 cc. </li><li> Sätt ut låt kisel röret i en vattenflaska och kolla flödet av gasblandning. </li><li> Rotera trumman med en hastighet av 20 varv / min. </li></...

<ol>
	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoroduction.+In+mammalian+postimplantation+embryos.">Intoroduction. In mammalian postimplantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Cockroft, D. L., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+culture+of+post+implantation+embryos.">Dissection and culture of post implantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 15-40 (1990).</li><li>Morris-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mammalian+embryos.">Postimplantation mammalian embryos.</a> Essential Developmental Biology A Practical Approach. , 55-66 (1993).</li><li>Fujinaga, M., Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+rodent+embryos+during+the+early+postimplantation+period.">In vitro culture of rodent embryos during the early postimplantation period.</a> Developmental Biology Protocols. , 53-76 (2000).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase.">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li><li>Osumi-Yamashita, N., Ninomiya, Y., Eto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+craniofacial+embryology+in+vitro.">Mammalian craniofacial embryology in vitro.</a> Int. J. Dev. Biol. 41, 187-194 (1997).</li><li>Inoue, T., Nakamura, S., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+of+the+mouse+prosencephalic+neural+plate.">Fate mapping of the mouse prosencephalic neural plate.</a> Dev. Biol. 219, 373-383 (2000).</li><li>Nomura, T., Holmberg, J., Frisen, J., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6-dependent+boundary+defines+alignment+of+migrating+olfactory+cortex+neurons+via+the+repulsive+activity+of+ephrin+A5.">Pax6-dependent boundary defines alignment of migrating olfactory cortex neurons via the repulsive activity of ephrin A5.</a> Development. 133, 1335-1345 (2006).</li><li>Inoue, Y. U., Asami, J., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+of+mouse+rhombomeres+by+Cadherin-6::EGFP-BAC+transgenesis+underscores+the+role+of+cadherins+in+hindbrain+compartmentalization.">Genetic labeling of mouse rhombomeres by Cadherin-6::EGFP-BAC transgenesis underscores the role of cadherins in hindbrain compartmentalization.</a> Neurosci. Res. 63, 2-9 (2009).</li><li>Calegari, F., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibition+of+cyclin-dependent+kinases+that+lengthens,+but+does+not+arrest,+neuroepithelial+cell+cycle+induces+premature+neurogenesis.">An inhibition of cyclin-dependent kinases that lengthens, but does not arrest, neuroepithelial cell cycle induces premature neurogenesis.</a> J. Cell Sci. 116, 4947-4955 (2003).</li><li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li><li>Arai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fabp7,+a+downstream+gene+of+Pax6,+in+the+maintenance+of+neuroepithelial+cells+during+early+embryonic+development+of+the+rat+cortex.">Role of Fabp7, a downstream gene of Pax6, in the maintenance of neuroepithelial cells during early embryonic development of the rat cortex.</a> J. Neurosci. 25, 9752-9761 (2005).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Dev. Growth Differ. 50, 485-497 (2008).</li></ol>

Det finns två viktiga steg i gnagare WEC för framgången. Första bör dissektion förfarandet vara korrekt att inte skada embryon, speciellt blodkärl. För det andra bör förfarandet så snabbt som möjligt eftersom syre och näringsämnen inte längre levereras via moderkakan efter isolering från livmodern. Detta är avgörande för äldre embryon. I fråga om råttan WEC efter E12.5, bör vi föra dissekeras embryon i kulturen flaskor inom 30 minuter. Vi har analyserat flyttmönster ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn </td><td> Typ </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentar </td></tr><tr><td colspan="5"> Ställa in WEC </td></tr><tr><td> WEC-systemet (10-0310) </td><td> Verktyg </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-0310 </td><td> En annan liten modell finns också. </td></tr><tr><td> Silicon plugg utan ett hål </td><td> Verktyg </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-08 </td><td></td></tr><tr><td> Gasblandning cylinder </td><td> Verktyg </td><td> Nikko Sanso </td><td> - </td><td> Innehåller 95% syre och 5% koldioxid. Anpassad ordning. </td></tr><tr><td> Gasregulator </td><td> Verktyg </td><td> Ono Seisakusho </td><td> WR-11 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 ìm filter Millex GS </td><td> Verktyg </td><td> Millipore </td><td> SLGS033SS </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Anestesi och isolering av livmodern </td></tr><tr><td> Stora sax </td><td> Verktyg </td><td> Napox </td><td> B-7H </td><td></td></tr><tr><td> Tång </td><td> Verktyg </td><td> Napox </td><td> A-3-2 </td><td></td></tr><tr><td> Avfallshantering petriskål (90 mm x 15 mm) </td><td> Verktyg </td><td> Iwaki </td><td> SH90-15 </td><td> Deep-typ maträtt är det bästa för dissekering. </td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Reagens </td><td> Abbott </td><td> B506 </td><td> För anestesi </td></tr><tr><td> Pentobarbital natrium </td><td> Reagens </td><td> Schering-Plough Animal Health </td><td> - </td><td> För anestesi </td></tr><tr><td> Tyrode är saltlösning </td><td> Reagens </td><td> - </td><td> - </td><td> Enligt som protokoll i Ref. 2. Spara vid 4 ° C. </td></tr><tr><td> Begränsad-gravida Sprague-Dawley råtta </td><td> Animal </td><td> Charles Rivers Laboratories Japan </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Beredning av odlingsmedium </td></tr><tr><td> Kultur glasflaska </td><td> Verktyg </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-05 </td><td></td></tr><tr><td> Avfallshantering kultur flaska </td><td> Verktyg </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-06 </td><td></td></tr><tr><td> Silicon kontakten med hål </td><td> Verktyg </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Aluminiumfolie </td><td> Verktyg </td><td> Alla företag </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td> Autoklavering väska </td><td> Verktyg </td><td> Hogy </td><td> HM-26 </td><td> För kultur flaskor </td></tr><tr><td> Autoklavering väska </td><td> Verktyg </td><td> Hogy </td><td> HM-14A </td><td> För kisel pluggar </td></tr><tr><td> 0,45 ìm filter Millex HA </td><td> Verktyg </td><td> Millipore </td><td> SLHA033SS </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml koniska rör </td><td> Verktyg </td><td> Becton Dickinson </td><td> 352.070 </td><td></td></tr><tr><td> 100 ml bägare </td><td> Verktyg </td><td> Iwaki </td><td> TE-32 </td><td></td></tr><tr><td> Rat IC serum </td><td> Reagens </td><td> Charles Rivers Laboratories Japan </td><td> - </td><td> Se: Mr Kunihiko Morisaki, TEL: +81- (0) 45-474-9336, Fax: +81- (0) 45-474-9340 </td></tr><tr><td> D (+)-Glukos </td><td> Reagens </td><td> Wako </td><td> 041-00.595 </td><td></td></tr><tr><td> Antibiotika-antimyotic flytande </td><td> Reagens </td><td> Gibco </td><td> 15.240 </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Dissektion av embryon </td></tr><tr><td> Ophthalmic rak sax </td><td> Verktyg </td><td> Napox </td><td> MB50-7 </td><td> För att skära i livmoderväggen </td></tr><tr><td> Ophthalmic böjd sax </td><td> Verktyg </td><td> Napox </td><td> MB54-2 </td><td> För att skära gulesäcken </td></tr><tr><td> Tång # 5 </td&gt; <td> Verktyg </td><td> Vigor </td><td> T6715 </td><td></td></tr><tr><td> Tång # 5F </td><td> Verktyg </td><td> Regine </td><td> T6819 </td><td></td></tr><tr><td> Glaspipett </td><td> Verktyg </td><td> - </td><td> - </td><td> Gjord för hand med pasteurpipett. </td></tr><tr><td> Autoklavering väska </td><td> Verktyg </td><td> Hogy </td><td> HM-4 </td><td> För glaspipetter </td></tr><tr><td> Binokulärt mikroskop </td><td> Verktyg </td><td> Leica </td><td> Mz7s </td><td></td></tr><tr><td> Ljus </td><td> Verktyg </td><td> Leica </td><td> CLS 150XD </td><td></td></tr><tr><td> Olja sten </td><td> Verktyg </td><td> Uchida Yoko </td><td> 833-2000 </td><td> För slipning av tång </td></tr><tr><td> Maskin olja </td><td> Verktyg </td><td> Uchida Yoko </td><td> 835-0000 </td><td> För slipning av tång </td></tr></tbody></table>

the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system

Hela embryo kultur (WEC) tekniken har utvecklats i 1950-talet av nya och hans kollegor, och ansökte om utvecklingsbiologi 1. Även utveckling och tillväxt av däggdjur embryon är mycket beroende på funktionen av moderkakan, gör att WEC tekniken oss att kultur mus och embryon råtta ex vivo tillstånd under begränsade perioder motsvarande midgestation steg under embryonala dag (E) 6,5-E12.5 i mus eller E8.5-E14.5 hos råtta 2, 3, 4. I WEC, vi kan inriktas direkt på önskade områden av embryon med hjälp av fina glas kapillärer eftersom embryon kan manipuleras under mikroskop. Därför är gnagare WEC mycket användbar teknik när vi vill studera dynamiska utvecklingsprocesser av postimplanted däggdjur embryon. Hittills har flera olika typer av WEC system utvecklats 1. Bland dessa är rotator-typ flaska kultur systemet mest populära och lämpliga för långtidsodling av embryon vid midgestation, dvs efter E9.5 och E11.5 i mus och råtta, respektive 1. I den här videon protokoll, visar vi vår standard förfaranden råtta WEC efter E12.5 med en förfinad modell av den ursprungliga rotator, som ritades av nya och Cockroft 5, 6, och införa olika tillämpningar av WEC teknik för studier i däggdjur utveckling biologi.

Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

Hela embryo kultur tekniken tillåter oss att kultur mus och embryon råtta<em&gt; Ex vivo</em&gt; Tillstånd under begränsade perioder motsvarande midgestation etapper. I den här videon protokoll, visar vi vår standard förfaranden råtta hela embryo kultur efter E12.5 med rotator-typ systemet flaska kultur.

Metoden för Gnagare Hela Embryo Culture med Rotator-typ System Bottle Kultur

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

Mus embryonala Lung kultur, ett system för att utvärdera de molekylära mekanismerna för Branching

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

En Ex-ovo Kyckling Embryo Culture lämpligt för bildbehandling och mikrokirurgi Applications

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Metod för embryonala Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Mouse embryonala utveckling i ett serumfritt Hela Embryo Culture System

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Den Slice Kultur Metod för att följa utveckling av Tand bakterier i Explantation kultur

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Beredning av Rat Serum Passar Mammalian Hela Embryo Culture

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Inrättandet av en extracellulär sura pH kultur System

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...

Evaluating the Angiogenetic Properties of Ovarian Cancer Stem-Like Cells using the Three-Dimensional Co-Culture System, NICO-1

Utvärdering av de angiogenetiska egenskaperna hos äggstockscancer stamliknande celler med hjälp av det tredimensionella samodlingssystemet, NICO-1

Cancer stem cells (CSCs) reside in a supportive niche, constituting a microenvironment comprised of adjacent stromal cells, vessels, and extracellular ...

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus AAV2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Processutveckling för produktion och rening av Adeno-associerat virus (AAV)2 Vektor med baculovirus-insektscellskultursystem

Adeno-associated viruses (AAV) are promising vectors for gene therapy applications. Here, the AAV2 vector is produced by co-culture of Spodoptera ...