Name: the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system
Uploaded: 2010-08-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

Biz Sayın Hajime Ichijo yararlı tavsiyelerde video kayıt ve video düzenleme için teşekkür ederim. Ayrıca video kayıt için türlü yardımcısı Drs.Yuji Tsunekawa ve Kaichi Yoshizaki teşekkür ederim. Bu çalışma Genç Bilimci B ve Japonya MEXT öncelik Alanları Moleküler Beyin Bilimi KAKENHI tarafından desteklenmektedir. Biz destek kabul Küresel COE Japon Bilim ve Teknoloji Kurumu (JST) Japon Bilim ve Teknoloji Kurumu Evrimsel Bilim ve Teknoloji Japonya MEXT Programı &quot;Küresel Beyin Bilim Temel ve Translasyonel Araştırma Merkezi&quot; ve Çekirdek Araştırma (CREST) .

1. WEC sistemi kurmak <ol><li> Ortak WEC sistemi içinde giriş silikon tüp filtre 0.22 mikron membran). </li><li> O 2 (% 95) ve CO 2 (% 5) içeren bir gaz silindir valfini açın. Otoklava su içeren köpürme şişe ile davul içine gaz karışımı akış. </li><li> Gaz karışımı akışını hacmi 50 cc ayarlayın. </li><li> Dışında bir su şişesi içine silikon tüp izin ve gaz karışımı akışını kontrol yerleştirin. </li><li> 20 dev / dak hızında davul döndürün...

<ol>
	<li>New, D. A. T., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intoroduction.+In+mammalian+postimplantation+embryos.">Intoroduction. In mammalian postimplantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 1-14 (1990).</li><li>Cockroft, D. L., Copp, A. J., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+culture+of+post+implantation+embryos.">Dissection and culture of post implantation embryos.</a> In Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach. , 15-40 (1990).</li><li>Morris-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mammalian+embryos.">Postimplantation mammalian embryos.</a> Essential Developmental Biology A Practical Approach. , 55-66 (1993).</li><li>Fujinaga, M., Tuan, R. S., Lo, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+culture+of+rodent+embryos+during+the+early+postimplantation+period.">In vitro culture of rodent embryos during the early postimplantation period.</a> Developmental Biology Protocols. , 53-76 (2000).</li><li>Eto, K., Takakubo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+development+of+rat+embryos+in+culture+during+the+period+of+craniofacial+morphogenesis.">Improved development of rat embryos in culture during the period of craniofacial morphogenesis.</a> J. Craniofac. Genet. Dev. Biol. 5, 351-355 (1985).</li><li>New, D. A., Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotating+bottle+culture+method+with+continuous+replacement+of+the+gas+phase.">A rotating bottle culture method with continuous replacement of the gas phase.</a> Experientia. 35, 138-140 (1979).</li><li>Osumi-Yamashita, N., Ninomiya, Y., Eto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+craniofacial+embryology+in+vitro.">Mammalian craniofacial embryology in vitro.</a> Int. J. Dev. Biol. 41, 187-194 (1997).</li><li>Inoue, T., Nakamura, S., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+mapping+of+the+mouse+prosencephalic+neural+plate.">Fate mapping of the mouse prosencephalic neural plate.</a> Dev. Biol. 219, 373-383 (2000).</li><li>Nomura, T., Holmberg, J., Frisen, J., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6-dependent+boundary+defines+alignment+of+migrating+olfactory+cortex+neurons+via+the+repulsive+activity+of+ephrin+A5.">Pax6-dependent boundary defines alignment of migrating olfactory cortex neurons via the repulsive activity of ephrin A5.</a> Development. 133, 1335-1345 (2006).</li><li>Inoue, Y. U., Asami, J., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+of+mouse+rhombomeres+by+Cadherin-6::EGFP-BAC+transgenesis+underscores+the+role+of+cadherins+in+hindbrain+compartmentalization.">Genetic labeling of mouse rhombomeres by Cadherin-6::EGFP-BAC transgenesis underscores the role of cadherins in hindbrain compartmentalization.</a> Neurosci. Res. 63, 2-9 (2009).</li><li>Calegari, F., Huttner, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibition+of+cyclin-dependent+kinases+that+lengthens,+but+does+not+arrest,+neuroepithelial+cell+cycle+induces+premature+neurogenesis.">An inhibition of cyclin-dependent kinases that lengthens, but does not arrest, neuroepithelial cell cycle induces premature neurogenesis.</a> J. Cell Sci. 116, 4947-4955 (2003).</li><li>Osumi, N., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+transfer+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Gene transfer into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Methods. 24, 35-42 (2001).</li><li>Arai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Fabp7,+a+downstream+gene+of+Pax6,+in+the+maintenance+of+neuroepithelial+cells+during+early+embryonic+development+of+the+rat+cortex.">Role of Fabp7, a downstream gene of Pax6, in the maintenance of neuroepithelial cells during early embryonic development of the rat cortex.</a> J. Neurosci. 25, 9752-9761 (2005).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Dev. Growth Differ. 50, 485-497 (2008).</li></ol>

Kemirgen WEC başarısı için iki önemli adım vardır. İlk olarak, diseksiyon prosedür değil zarar embriyolar, özellikle kan damarları doğru olmalıdır. İkincisi, oksijen ve besin artık rahim izolasyon sonra plasenta yoluyla sağlanan çünkü prosedürü mümkün olduğunca çabuk olmalıdır. Bu büyük embriyoları için kritik öneme sahiptir. E12.5 sonra sıçan WEC durumda, biz 30 dakika içinde disseke embriyoların kültürü şişeleri içine aktarmanız gerekir. Biz, h?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorum </td></tr><tr><td colspan="5"> WEC ayarlama </td></tr><tr><td> WEC sistemi (10-0310) </td><td> Araç </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-0310 </td><td> Başka bir küçük modeli de mevcuttur. </td></tr><tr><td> Deliksiz Silikon fişi </td><td> Araç </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-08 </td><td></td></tr><tr><td> Gaz karışımı silindir </td><td> Araç </td><td> Nikko Sanso </td><td> - </td><td> % 95 oksijen ve% 5 karbon dioksit içeren. Özel sipariş edin. </td></tr><tr><td> Gaz regülatör </td><td> Araç </td><td> Ono Seisakusho </td><td> WR-11 </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 mikron filtre Millex GS </td><td> Araç </td><td> Millipore </td><td> SLGS033SS </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Anestezi ve rahim izolasyonu </td></tr><tr><td> Büyük makas </td><td> Araç </td><td> Napox </td><td> B-7H </td><td></td></tr><tr><td> Forseps </td><td> Araç </td><td> Napox </td><td> A-3-2 </td><td></td></tr><tr><td> Bertaraf Petri kabı (90 mm x 15 mm) </td><td> Araç </td><td> Iwaki </td><td> SH90-15 </td><td> Derin tipi bulaşık diseksiyon için iyi. </td></tr><tr><td> İsofluranın </td><td> Reaktif </td><td> Abbott </td><td> B506 </td><td> Anestezi için </td></tr><tr><td> Pentobarbital sodyum </td><td> Reaktif </td><td> Schering-Plough Hayvan Sağlığı </td><td> - </td><td> Anestezi için </td></tr><tr><td> Tyrode en tuzlu </td><td> Reaktif </td><td> - </td><td> - </td><td> Ref protokole göre. 2. 4 Kaydet ° C </td></tr><tr><td> Zamanlı gebe Sprague-Dawley sıçan </td><td> Hayvan </td><td> Charles Rivers Laboratuvarlar Japonya </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Kültür ortamı hazırlanması </td></tr><tr><td> Kültür cam şişe </td><td> Araç </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-05 </td><td></td></tr><tr><td> Bertaraf kültür şişesi </td><td> Araç </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-06 </td><td></td></tr><tr><td> Silikon fiş ile delik </td><td> Araç </td><td> Ikemoto Rika </td><td> 010-032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Alüminyum folyo </td><td> Araç </td><td> Herhangi bir şirket </td><td> - </td><td></td></tr><tr><td> Otoklav torbası </td><td> Araç </td><td> Hogy </td><td> HM-26 </td><td> Kültürü şişeleri için </td></tr><tr><td> Otoklav torbası </td><td> Araç </td><td> Hogy </td><td> HM-14A </td><td> Silikon fişler </td></tr><tr><td> 0.45 mikron filtre Millex HA </td><td> Araç </td><td> Millipore </td><td> SLHA033SS </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml konik tüp </td><td> Araç </td><td> Becton Dickinson </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> 100 ml beher </td><td> Araç </td><td> Iwaki </td><td> TE-32 </td><td></td></tr><tr><td> Rat IC Serum </td><td> Reaktif </td><td> Charles Rivers Laboratuvarlar Japonya </td><td> - </td><td> Bakın: Sayın Kunihiko Morisaki TEL: +81- (0) 45-474-9336 Faks: +81- (0) 45-474-9340 </td></tr><tr><td> D-Glukoz (+) </td><td> Reaktif </td><td> Wako </td><td> 041-00595 </td><td></td></tr><tr><td> Antibiyotik-antimyotic sıvı </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 15240 </td><td></td></tr><tr><td colspan="5"> Embriyoların diseksiyonu </td></tr><tr><td> Oftalmik düz makas </td><td> Araç </td><td> Napox </td><td> MB50-7 </td><td> Rahim duvarına kesim için </td></tr><tr><td> Oftalmik kavisli makas </td><td> Araç </td><td> Napox </td><td> MB54-2 </td><td> Yolk sac kesim için </td></tr><tr><td> Forseps # 5 </td&gt; <td> Araç </td><td> Dinçlik </td><td> T6715 </td><td></td></tr><tr><td> Forseps # 5F </td><td> Araç </td><td> Regine </td><td> T6819 </td><td></td></tr><tr><td> Cam pipet </td><td> Araç </td><td> - </td><td> - </td><td> Pasteur pipeti kullanarak el ile yapılmıştır. </td></tr><tr><td> Otoklav torbası </td><td> Araç </td><td> Hogy </td><td> HM-4 </td><td> Cam pipetler </td></tr><tr><td> Binoküler mikroskop </td><td> Araç </td><td> Leica </td><td> Mz7s </td><td></td></tr><tr><td> Işık </td><td> Araç </td><td> Leica </td><td> CLS 150XD </td><td></td></tr><tr><td> Petrol taş </td><td> Araç </td><td> Uchida Yoko </td><td> 833-2000 </td><td> Forseps keskinleşmesi için </td></tr><tr><td> Makine yağı </td><td> Araç </td><td> Uchida Yoko </td><td> 835-0000 </td><td> Forseps keskinleşmesi için </td></tr></tbody></table>

the method of rodent whole embryo culture using the rotator-type bottle culture system

Tüm embriyo kültürü (WEC) tekniği, Yeni ve arkadaşları tarafından 1950&#39;li yıllarda geliştirilmiş ve gelişim biyolojisi 1 için uygulanan olmuştur . Memeli embriyolarının gelişim ve büyüme plasentanın fonksiyonu üzerine eleştirel bağımlı olmasına rağmen, WEC teknik embriyonik gün (E) 6.5-E12.5 sırasında midgestation aşamalarına karşılık gelen sınırlı dönemlerde kültür fare ve sıçan embriyolar ex vivo durumu sağlar fare veya sıçan 2, 3, 4 E8.5-E14.5. Embriyoların mikroskop altında manipüle edilebilir, çünkü WEC, ince cam kapilerleri kullanarak embriyo alanlarda doğrudan istenen hedef yapabilirsiniz. Bu nedenle, biz postimplanted memeli embriyolarının dinamik gelişim süreçlerini incelemek için istediğiniz zaman kemirgen WEC çok yararlı bir tekniktir. Bugüne kadar, çeşitli WEC sistemleri 1 geliştirilmiştir. Bunların arasında, sırasıyla 1, fare ve sıçan E9.5 ve E11.5, sonra rotator tip şişe kültür sistemi, en popüler ve en uzun vadeli midgestation, yani embriyoların kültürü için uygundur . Bu video protokolde, Yeni ve Cockroft 5, 6 tarafından tasarlanmış orijinal rotator sistemi, zarif bir model kullanılarak E12.5 sonra sıçan WEC standart prosedürler göstermek ve memeli gelişim çalışmaları için WEC tekniğin çeşitli uygulamalarını tanıtmak biyolojisi.

Watch this Scientific Journal Video about The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System at JoVE.com

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

Tüm embriyo kültürü tekniği kültür fare ve sıçan embriyolar için bize izin verir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Midgestation aşamaları ile ilgili sınırlı dönemlerinde durum. Bu video protokolde, E12.5 rotator tip şişe kültür sistemi kullanarak sonra sıçan tüm embriyo kültürü standart prosedürleri göstermektedir.

Rotator-tipi Şişe Kültür Sistemi kullanılarak Kemirgen Tüm Embriyo Kültürü Yöntemi

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

Fare Embriyonik Akciğer Kültür, Dallanma Moleküler Mekanizmalar değerlendirin Bir Sistem

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

Bir Eski-ovo</emGörüntüleme ve Mikrocerrahi Uygulamaları için uygundur> Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Yeni Bir<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Fare Kalp için&gt; Kültür Yöntemi

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Serumsuz Tüm Embriyo Kültür Sistemde Fare Embriyonik Development

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Eksplantasyon Kültüründe Diş mikropların Geliştirme takiben için Dilim Kültür Yöntemi

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Preparation of Rat Serum Suitable for Mammalian Whole Embryo Culture

Memeli Tüm Embriyo Kültürü için uygun Rat Serum hazırlanması

Mammalian whole embryo culture (WEC) is a widely used technique for examining pharmacological toxicity in developing mouse and rat embryos and for ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Bir hücre dışı asidik pH kültür sistemi kurulması

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...

Evaluating the Angiogenetic Properties of Ovarian Cancer Stem-Like Cells using the Three-Dimensional Co-Culture System, NICO-1

Üç Boyutlu Eş-Kültür Sistemi Kullanılarak Yumurtalık Kanseri Kök Benzeri Hücrelerin Anjiyogenetik Özelliklerinin Değerlendirilmesi, NICO-1

Cancer stem cells (CSCs) reside in a supportive niche, constituting a microenvironment comprised of adjacent stromal cells, vessels, and extracellular ...

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus (AAV)2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Process Development for the Production and Purification of Adeno-Associated Virus AAV2 Vector using Baculovirus-Insect Cell Culture System

Baculovirus-Insect Hücre Kültürü Sistemi Kullanılarak Adeno-İlişkili Virüsün (AAV)2 Vektörün Üretimi ve Saflaştırılması için Süreç Geliştirme

Adeno-associated viruses (AAV) are promising vectors for gene therapy applications. Here, the AAV2 vector is produced by co-culture of Spodoptera ...